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in vivoでの高効率遺伝子改変にもご利用いただけます Cas9 タンパク質

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メーカー名：Applied Biological Materials Inc.

Applied Biological Materials社では、リコンビナント Cas9 タンパク質（Cas9 Nuclease Protein）を販売しています。in vivo での高効率遺伝子改変にもご利用いただけます

［関連商品］CRISPR Genomic Cleavage Detection Kit

背景

CRISPR-Cas9システム（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）は、特異的なゲノムの破壊や置換などを可能にする最新のゲノム編集技術です。本システムでは、標的特異的な単鎖ガイドRNA（sgRNA：single guide RNA）によってCas9ヌクレアーゼタンパク質がsgRNA認識配列に誘導され、ゲノムDNA二本鎖をほどき、切断します。このDNA二本鎖切断（DSBs）によってNHEJ（非相同末端結合；non-homologous end joining）のDNA修復機構が機能しますが、CRISPR-Cas9が過剰に発現していることによりエラーが生じ、フレームシフトすることで標的遺伝子のオープンリーディングフレーム破壊につながります。

仕様・構成内容

品名	Cas9 Protein	High Concentration Cas9 Protein
濃度	1000 nM	10 µM
容量	50 pmol (50 μL)	250 pmol (25 μL)
構成内容	Cas9 Protein (1000 nM)　50 μL 10X Cas9 Protein Reaction Buffer　1.25 mL	Cas9 Protein (10 µM)　25 μL 10X Cas9 Protein Reaction Buffer　1.25 mL
その他仕様	保存バッファー：10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 300 mM NaCl, and 50% (v/v) Glycerol. 10X Cas9 Protein Reaction Buffer ：200 mM HEPES, 50 mM MgCl, 1 M NaCl, 50 mM MgCl, 1 mM EDTA, pH 6.5. タンパク質由来：Recombinant E. coli.

製品データ

図1. Cas9のヌクレアーゼ活性の検証（品番：K008）
8kbのDNA基質を分解した結果、～75%の効率でDNAが開裂され、～3kbと～5kbのバンドが形成された。

図2. Cas9のヌクレアーゼ活性の検証（品番：K030）
8kbのDNA基質を分解した結果、～95%の効率でDNAが開裂され、～3kbと～5kbのバンドが形成された。

1 = freeze-thaw vector (not supercoiled)
2 = no sgRNA control (supercoiled)
3 = [100nM] of Cas9
4 = [50nM] of Cas9
5 = [25nM] of Cas9
6 = [10nM] of Cas9

図3. Cas9のヌクレアーゼ活性の検証（品番：K034）
ニックが入り、Cas9濃度依存的にオープンサーキュラープラスミドが形成された。オープンサーキュラープラスミドは、スーパーコイルDNAと比較してよりゆっくりとゲル中を移動する。

結果

どちらのCas9もsgDNA存在下でのみ、DNAを開裂した
品番：K008は開裂効率～75%、品番：K030は～95%を示した
品番：K030は他社品よりも優れた開裂効率を示した
品番：K034は濃度100nM、37℃、1時間インキュベートすると、100%のプラスミドにニックが入った

Cas9 Protein

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Cas9 Nuclease Protein	APB	K008	50 PMOL [50 μl, 1000 nM]	お問い合わせ
Cas9 Nuclease NLS Protein	APB	K030	50 PMOL [50 μl, 1000 nM]	￥8,000
Cas9 Nuclease GFP NLS Protein	APB	K048	50 PMOL [50 μl]	￥11,000
Cas9 Nickase D10A Protein	APB	K032	50 PMOL [50 μl, 1000 nM]	お問い合わせ
Cas9 D10A Nickase GFP NLS Protein	APB	K049	50 PMOL [50 μl]	お問い合わせ
Cas9 Nickase D10A NLS Protein	APB	K034	50 PMOL [50 μl, 1000 nM]	お問い合わせ
Cas9 Nickase H840A Protein	APB	K036	50 PMOL [50 μl, 1000 nM]	お問い合わせ
Cas9 Nickase H840A NLS Protein	APB	K038	50 PMOL [50 μl, 1000 nM]	お問い合わせ
Cas9 Null Mutant Protein	APB	K040	50 PMOL [50 μl, 1000 nM]	お問い合わせ
Cas9 Null Mutant NLS Protein	APB	K042	50 PMOL [50 μl, 1000 nM]	お問い合わせ

High Concentration Cas9 Protein

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Cas9 Nuclease Protein	APB	K108	250 PMOL [25 μl, 10 μM]	￥17,000
Cas9 Nuclease NLS Protein	APB	K130	250 PMOL [25 μl, 10 μM]	￥17,000
Cas9 Nuclease GFP NLS Protein	APB	K148	250 PMOL [25 μl]	￥32,000
Cas9 Nickase D10A Protein	APB	K132	250 PMOL [25 μl, 10 μM]	お問い合わせ
Cas9 Nickase D10A NLS Protein	APB	K134	250 PMOL [25 μl, 10 μM]	￥28,000
Cas9 D10A Nickase GFP NLS Protein	APB	K149	250 PMOL [25 μl]	￥32,000
Cas9 Nickase H840A Protein	APB	K136	250 PMOL [25 μl, 10 μM]	お問い合わせ
Cas9 Nickase H840A NLS Protein	APB	K138	250 PMOL [25 μl, 10 μM]	￥28,000
Cas9 Null Mutant Protein	APB	K140	250 PMOL [25 μl, 10 μM]	￥28,000
Cas9 Null Mutant NLS Protein	APB	K142	250 PMOL [25 μl, 10 μM]	￥28,000