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商品情報

記事ID : 15213
研究用

in vivoでの高効率遺伝子改変にもご利用いただけます Cas9 タンパク質

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Applied Biological Materials社では、リコンビナント Cas9 タンパク質(Cas9 Nuclease Protein)を販売しています。in vivo での高効率遺伝子改変にもご利用いただけます

背景

CRISPR-Cas9システム(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)は、特異的なゲノムの破壊や置換などを可能にする最新のゲノム編集技術です。本システムでは、標的特異的な単鎖ガイドRNA(sgRNA:single guide RNA)によってCas9ヌクレアーゼタンパク質がsgRNA認識配列に誘導され、ゲノムDNA二本鎖をほどき、切断します。このDNA二本鎖切断(DSBs)によってNHEJ(非相同末端結合;non-homologous end joining)のDNA修復機構が機能しますが、CRISPR-Cas9が過剰に発現していることによりエラーが生じ、フレームシフトすることで標的遺伝子のオープンリーディングフレーム破壊につながります。

Cas9 mechanism

仕様・構成内容

品名
Cas9 Protein
High Concentration Cas9 Protein
濃度 1000 nM 10 µM
容量 50 pmol (50 μL)

250 pmol (25 μL)

構成内容
  • Cas9 Protein (1000 nM) 50 μL
  • 10X Cas9 Protein Reaction Buffer 1.25 mL
  • Cas9 Protein (10 µM) 25 μL
  • 10X Cas9 Protein Reaction Buffer 1.25 mL
その他
仕様
  • 保存バッファー
    :10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 300 mM NaCl, and 50% (v/v) Glycerol.
  • 10X Cas9 Protein Reaction Buffer
    :200 mM HEPES, 50 mM MgCl, 1 M NaCl, 50 mM MgCl, 1 mM EDTA, pH 6.5.
  • タンパク質由来
    :Recombinant E. coli.

製品データ

Cas9のヌクレアーゼ活性(K008)

図1. Cas9のヌクレアーゼ活性の検証(品番:K008)
8kbのDNA基質を分解した結果、〜75%の効率でDNAが開裂され、〜3kbと〜5kbのバンドが形成された。

Cas9のヌクレアーゼ活性(K030)

図2. Cas9のヌクレアーゼ活性の検証(品番:K030)
8kbのDNA基質を分解した結果、〜95%の効率でDNAが開裂され、〜3kbと〜5kbのバンドが形成された。

Cas9のヌクレアーゼ活性(K034)

  • 1 = freeze-thaw vector (not supercoiled)
  • 2 = no sgRNA control (supercoiled)
  • 3 = [100nM] of Cas9
  • 4 = [50nM] of Cas9
  • 5 = [25nM] of Cas9
  • 6 = [10nM] of Cas9

図3. Cas9のヌクレアーゼ活性の検証(品番:K034)
ニックが入り、Cas9濃度依存的にオープンサーキュラープラスミドが形成された。オープンサーキュラープラスミドは、スーパーコイルDNAと比較してよりゆっくりとゲル中を移動する。

結果

  • どちらのCas9もsgDNA存在下でのみ、DNAを開裂した
  • 品番:K008は開裂効率〜75%、品番:K030は〜95%を示した
  • 品番:K030は他社品よりも優れた開裂効率を示した
  • 品番:K034は濃度100nM、37℃、1時間インキュベートすると、100%のプラスミドにニックが入った

Cas9 Protein

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Cas9 Nuclease Protein詳細データ APB K008 50 PMOL
[50 μl, 1000 nM]
¥4,000
Cas9 Nuclease NLS Protein詳細データ APB K030 50 PMOL
[50 μl, 1000 nM]
¥4,000
Cas9 Nuclease GFP NLS Protein詳細データ APB K048 50 PMOL
[50 μl]
¥8,000
Cas9 Nickase D10A Protein詳細データ APB K032 50 PMOL
[50 μl, 1000 nM]
¥7,000
Cas9 D10A Nickase GFP NLS Protein詳細データ APB K049 50 PMOL
[50 μl]
¥8,000
Cas9 Nickase D10A NLS Protein詳細データ APB K034 50 PMOL
[50 μl, 1000 nM]
¥7,000
Cas9 Nickase H840A Protein詳細データ APB K036 50 PMOL
[50 μl, 1000 nM]
¥7,000
Cas9 Nickase H840A NLS Protein詳細データ APB K038 50 PMOL
[50 μl, 1000 nM]
¥7,000
Cas9 Null Mutant Protein詳細データ APB K040 50 PMOL
[50 μl, 1000 nM]
¥7,000
Cas9 Null Mutant NLS Protein詳細データ APB K042 50 PMOL
[50 μl, 1000 nM]
¥7,000

High Concentration Cas9 Protein

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Cas9 Nuclease Protein High Concentraion詳細データ APB K108 250 PMOL
[25 μl, 10 μM]
¥12,000
Cas9 Nuclease NLS Protein High Concentraion詳細データ APB K130 250 PMOL
[25 μl, 10 μM]
¥12,000
Cas9 Nuclease GFP NLS Protein詳細データ APB K148 250 PMOL
[25 μl]
¥24,000
Cas9 Nickase D10A Protein High Concentraion詳細データ APB K132 250 PMOL
[25 μl, 10 μM]
¥21,000
Cas9 Nickase D10A NLS Protein High Concentraion詳細データ APB K134 250 PMOL
[25 μl, 10 μM]
¥21,000
Cas9 D10A Nickase GFP NLS Protein詳細データ APB K149 250 PMOL
[25 μl]
¥24,000
Cas9 Nickase H840A Protein High Concentraion詳細データ APB K136 250 PMOL
[25 μl, 10 μM]
¥21,000
Cas9 Nickase H840A NLS Protein High Concentraion詳細データ APB K138 250 PMOL
[25 μl, 10 μM]
¥21,000
Cas9 Null Mutant Protein High Concentraion詳細データ APB K140 250 PMOL
[25 μl, 10 μM]
¥21,000
Cas9 Null Mutant NLS Protein High Concentraion詳細データ APB K142 250 PMOL
[25 μl, 10 μM]
¥21,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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