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AAT Bioquest社 CD (分化抗原群：Cluster of Differentiation)

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メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

CD (分化抗原群：Cluster of Differentiation) は免疫系細胞に発現する細胞表面分子であり、免疫細胞-細胞間コミュニケーション、微小環境の感知、獲得免疫に重要な役割を果たします。リンパ球の成熟過程で、免疫細胞は細胞表面に複雑なバリエーションの CD抗原を発現し、その一部は失われますが、その他は抗原提示細胞 (APC) または免疫系の他の細胞との相互作用によって様々な段階で獲得されます。フローサイトメトリーによるイムノフェノタイピングでは、白血球集団、亜集団、分化段階の同定・特徴付けに CD抗原を標的とするモノクローナル抗体が広く用いられています。

AAT Bioquest社では、フローサイトメトリー、免疫組織染色、イムノブロットなどの幅広い研究分野に適用できる精製された抗ヒトCD抗体や蛍光標識されたCD抗体結合体を提供しています。

【目次】

イムノフェノタイピング (Immunophenotyping)
CD の命名法
CD抗体

iFluor™ 標識 CD抗体
mFluor™ 標識 CD抗体
Alexa Fluor® 標識 CD抗体
従来の蛍光標識CD抗体
PE、APC、PerCP 及びタンデム蛍光標識CD抗体

表1 フローサイトメトリーによる白血球の区別に使用される一般的なCDマーカー
細胞タイプ	一般的なヒトCDマーカー	一般的なマウスCDマーカー
T Cell	CD3, CD4, CD8	CD3, CD4, CD8
B Cell	CD19, CD20	CD45R/B220, CD19, CD 22 (B cell activation marker)
Dendritic Cell	CD11c, CD123	CD11c, CD123
Natural Killer (NK) Cell	CD56	CD335 (NKp46)
Stem Cell/Precursor	CD34 (hematopoietic stem cell only)	CD34 (hematopoietic stem cell only)
Monocyte/Macrophage	CD14, CD33	CD11b/Mac-1, Ly-71 (F4/80)
Granulocyte	CD66b	CD66b, Gr-1/Ly6G, Ly6C
Platelet	CD41, CD61, CD62	CD41, CD61 (Integrin Β3), CD9, CD62P (activated platelets)
Erythrocyte	CD235a	CD235a, Ter-119
Endothelial Cell	CD146	CD146 MECA-32, CD106, CD31, CD62E (activated endothelial cells)
Epithelial Cell	CD326	CD326 (EPCAM1)

イムノフェノタイピング (Immunophenotyping)

免疫細胞は、発生や細胞活性化の様々な段階で CD抗原を発現するため、CD抗原は白血球集団や亜集団を区別するための信頼できるバイオマーカーであり、このマーカーを識別する技術は、イムノフェノタイピングと呼ばれています。例えば、CD3はすべての成熟T細胞の表面に発現するT細胞補助受容体であり、CD4 や CD8抗原にはそれぞれヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞の表面に発現します。

さらに、CD抗原の発現は、ある種の疾患状態に影響を受けるため、白血病やリンパ腫を特定するための診断因子や予後因子としてよく使用されます。例えば、多発性骨髄腫は一般的に、CD38 を発現し、CD19 や CD20 は発現しない細胞として特徴付けられています。CD抗原は様々な程度で多様な細胞に発現するため、蛍光標識された CD抗体を 2種類以上組み合わせて利用するマルチパラメータフローサイトメトリー分析により、特定の細胞タイプ、サブタイプを明確に分離できます。

CD の命名法

CDの命名法は、世界保健機関 (WHO) によって認可された世界的に採用されている指定システムです。このシステムは、白血球の表面分子上のエピトープに対するモノクローナル抗体 (mAb) の分類用に設計されました。細胞表面分子を特徴づけるのが難しい場合、または単一の mAb によってのみ認識される分子の場合、それらには「CDw」という名称が付けられます (例：CDw60、CDw156)。表面分子がよく特徴付けられている場合 (2つ以上の mAb によって認識される場合)、CD4、CD8、CD45 などの任意の値が割り当てられます。

CDの命名法は、リンパ球と白血球のサブタイプを説明するためにも使用されます。特定細胞集団の細胞表面上の特定抗原のあり、なしは、それぞれ「+」または「-」で示されます。CD番号に追加された「+」記号は、細胞または細胞集団にその分子が存在することを示し、「-」はその分子が存在しないことを示します。たとえば、「CD45 + / CD20-」細胞は CD45 を発現しますが、CD20 は発現していないことを示します。細胞集団は、特に研究されている他の細胞と比較した場合、CD発現の全体的な変動性を示す高または低として定義することもできます。

表2 CD命名法のルール
指定 Designation	配置 Placement	定義 Definition	例
任意の番号	CDの後ろに付ける	2つ以上の mAb に認識される分子に割り当てられる。番号は、細胞表面分子を認識する mAb グループと分子自体の両方を示す。	CD4
小文字 "w"	任意の番号の前に付ける	特性が不十分な分子、または単一の mAb に認識される分子に割り当てられる。（W =ワークショップ）	CDw15
小文字	任意の番号の後ろに付ける	共通鎖や同じ遺伝子ファミリーなど、共通性を共有する分子に割り当てられる。	CD1a-CD1e は共通鎖を共有 CD66a-CD66f は同じ遺伝子ファミリー
大文字	任意の番号の後ろに付ける	細胞表面分子の細胞外ドメインのスプライシングバリアントを示す。	CD45RA、CD45RO
上付き文字 "+ / -"	任意の番号の後ろに付ける	細胞もしくは細胞集団において、その分子の有無を示す。	CD4⁺CD8^-
上付き文字 "high / low"	任意の番号もしくは大文字の後ろに付ける	細胞サブセットによるＣＤ分子の発現レベルを示す。	CD4⁺CD45RA^lowCD45RO^high

CD抗体

AAT Bioquest社では、マルチカラーフローサイトメトリー、免疫組織染色、機能アッセイ用に精製されたCD抗体、蛍光標識CD抗体の包括的なセレクションを提供しています。利用可能な蛍光標識は次のとおりです。

iFluor™ 標識 - FACS、蛍光イメージング、in vivo イメージングに適した明るい光安定色素
mFluor™ 標識 - FACSに適した明るい光安定色素
Alexa Fluor® 標識 - FACS、蛍光イメージングに適した色素
従来の蛍光標識 - FACS、蛍光イメージングに適した色素
PE、APC、PerCP およびタンデム蛍光標識 - FACS、マルチパラメトリック分析に適した非常に明るい色素

▼表3. 精製済み非標識CDモノクローナル抗体　商品リスト　※クリックで開閉

品名	クローン	サイズ	品番
Anti-human CD1 Antibody	HI149	100 µg	10010000
Anti-human CD2 Antibody	HIT11	100 µg	10020000
Anti-human CD2 Antibody	RPA-2.10	100 µg	10021000
Anti-human CD3 Antibody	HIT3a	100 µg	10030000
Anti-human CD3 Antibody	HIT3b	100 µg	10031000
Anti-human CD3 Antibody	OKT-3	100 µg	10034000
Anti-human CD3 Antibody	SK7	100 µg	10033000
Anti-human CD3 Antibody	UCHT1	100 µg	10032000
Anti-human CD4 Antibody	RPA-T4	100 µg	10041000
Anti-human CD4 Antibody	HIT4a	100 µg	10040000
Anti-human CD4 Antibody	OKT-4	100 µg	10043000
Anti-human CD4 Antibody	SK3	100 µg	10042000
Anti-human CD5 Antibody	HISM2	100 µg	10050000
Anti-human CD5 Antibody	L17F12	100 µg	10051000
Anti-human CD5 Antibody	UCHT2	100 µg	10052000
Anti-human CD6 Antibody	HI210	100 µg	10060000
Anti-human CD7 Antibody	HIT7	100 µg	10070000
Anti-human CD8 Antibody	SK1	100 µg	10081000
Anti-human CD8 Antibody	HIT8a	100 µg	10080000
Anti-human CD8 Antibody	OKT-8	100 µg	10082000
Anti-human CD9 Antibody	HI9a	100 µg	10090000
Anti-human CD10 Antibody	HI10a	100 µg	10100000
Anti-human CD11a Antibody	HI111	100 µg	10110000
Anti-human CD11b Antibody	HI11b	100 µg	10111000
Anti-human CD11b Antibody	ICRF44	100 µg	10112000
Anti-human CD11c Antibody	3.9	100 µg	10113000
Anti-human CD13 Antibody	WM15	100 µg	10130000
Anti-human CD14 Antibody	61D3	100 µg	10141000
Anti-human CD14 Antibody	HI221	100 µg	10140000
Anti-human CD15 Antibody	HI98	100 µg	10150000
Anti-human CD18 Antibody	HI18a	100 µg	10180000
Anti-human CD19 Antibody	HI19a	100 µg	10190000
Anti-human CD19 Antibody	HIB19	100 µg	10192000
Anti-human CD19 Antibody	SJ25C1	100 µg	10191000
Anti-human CD20 Antibody	HI20a	100 µg	10201000
Anti-human CD20 Antibody	HI47	100 µg	10200000
Anti-human CD21 Antibody	HI21a	100 µg	10210000
Anti-human CD22 Antibody	HIB22	100 µg	10220000
Anti-human CD24 Antibody	HI45	100 µg	10240000
Anti-human CD25 Antibody	HI25a	100 µg	10250000
Anti-human CD28 Antibody	CD28.2	100 µg	10280000
Anti-human CD29 Antibody	HI29a	100 µg	10290000
Anti-human CD33 Antibody	HI33a	100 µg	10330000
Anti-human CD33 Antibody	HIM3-4	100 µg	10331000
Anti-human CD34 Antibody	4H11	100 µg	10340000
Anti-human CD38 Antibody	HI157	100 µg	10381000
Anti-human CD38 Antibody	HIT2	100 µg	10380000
Anti-human CD40 Antibody	HI40a	100 µg	10400000
Anti-human CD44 Antibody	HERMES-1	100 µg	10443000
Anti-human CD44 Antibody	HI44a	100 µg	10440000
Anti-human/mouse CD44 Antibody	IM7	100 µg	10441000
Anti-human CD45 Antibody	2D1	100 µg	10454000
Anti-human CD45 Antibody	HI100	100 µg	10455000
Anti-human CD45 Antibody	HI151	100 µg	10452000
Anti-human CD45 Antibody	HI185	100 µg	10453000
Anti-human CD45 Antibody	HI30	100 µg	10450000
Anti-human CD45 Antibody	HI73	100 µg	10451000
Anti-human CD45 Antibody	UCHL1	100 µg	10456000

iFluor™ 標識 CD抗体

次の表は、フローサイトメトリー（FACS）および蛍光イメージングアプリケーションで使用可能な iFluor™標識抗ヒトCD抗体の蛍光特性の概要を示しています。iFluor™色素で作られたコンジュゲートは、優れた輝度と光安定性を示し、AlexaFluor®コンジュゲートやその他のスペクトル的に類似したコンジュゲートよりも優れています。

▼表4. iFluor™ 標識 CD抗体　※クリックで開閉

標識	Ex (nm)	Em (nm)	ε	φ	CF 260 nm	CF 280 nm
iFluor™ 350	344	448	20000	0.95	0.83	0.23
iFluor™ 405	402	425	37000	0.91	0.48	0.77
iFluor™ 430	433	495	40000	0.78	0.68	0.3
iFluor™ 450	451	502	40000	0.82	0.45	0.27
iFluor™ 488	491	516	75000	0.9	0.21	0.11
iFluor™ 514	527	554	80000	0.83	0.25	0.11
iFluor™ 532	543	563	90000	0.68	0.26	0.16
iFluor™ 546	541	557	100000	0.67	0.25	0.15
iFluor™ 555	556	569	100000	0.64	0.23	0.14
iFluor™ 560	559	571	130000	0.57	0.048	0.069
iFluor™ 568	568	587	100000	0.57	0.34	0.15
iFluor™ 594	587	603	180000	0.53	0.05	0.04
iFluor™ 610	609	627	110000	0.85	0.32	0.49
iFluor™ 633	638	652	250000	0.29	0.062	0.044
iFluor™ 647	654	669	250000	0.25	0.03	0.03
iFluor™ 660	660	677	250000	0.26	0.07	0.08
iFluor™ 670	669	682	250000	0.63	0.019	0.024
iFluor™ 680	683	700	220000	0.23	0.097	0.094
iFluor™ 700	690	713	220000	0.23	0.09	0.04
iFluor™ 710	712	736	190000	0.14	0.12	0.07
iFluor™ 750	759	777	275000	0.12	0.044	0.039
iFluor™ A7	759	780	275000	0.1	0.03	0.03
iFluor™ 790	786	811	250000	0.13	0.1	0.09
iFluor™ 800	801	820	250000	0.11	0.03	0.08
iFluor™ 810	811	822	250000	0.05	0.09	0.15
iFluor™ 820	820	849	250000	N/A	0.11	0.16
iFluor™ 840	836	876	200000	0.02	0.2	0.09
iFluor™ 860	852	877	250000	N/A	0.1	0.14

NOTE：
ε= molar extinction coefficient at their maximum absorption wavelength (Units = cm^-1M^-1).
φ= fluorescence quantum yield in aqueous buffer (pH 7.2).
CF at 260 nm is the correction factor used for eliminating the dye contribution to the absorbance at 260 nm (for oligo and nucleic acid labeling).
CF at 280 nm is the correction factor used for eliminating the dye contribution to the absorbance at 280 nm (for peptides and protein labeling).

mFluor™ 標識 CD抗体

次の表は、フローサイトメトリー（FACS）で使用可能な mFluor™標識抗ヒトCD抗体の蛍光特性の概要を示しています。各mFluor™色素は、405 nm、488 nm、532 nm、561 nm、または633 nmのレーザーラインなど、フローサイトメーターに一般的に装備されている主要なレーザーラインで励起されます。

▼表5. mFluor™ 標識 CD抗体　※クリックで開閉

標識	Ex (nm)	Em (nm)	ε	φ	CF 260 nm	CF 280 nm
mFluor™ UV375	354	388	35000	0.94	0.099	0.138
mFluor™ Violet 450	406	445	25000	0.92	0.338	0.078
mFluor™ UV460	362	456	15000	0.86	0.35	0.134
mFluor™ Violet 500	426	497	35000	0.81	0.769	0.365
mFluor™ Violet 510	409	504	30000	0.86	0.464	0.366
mFluor™ Violet 540	400	532	15000	0.64	1.392	0.529
mFluor™ Blue 570	552	564	120000	0.08	0.228	0.179
mFluor™ Green 620	521	617	50000	0.06	0.895	0.569
mFluor™ Yellow 630	546	625	110000	0.01	0.283	0.413
mFluor™ Red 700	657	694	250000	0.029	0.135	0.127
mFluor™ Red 780	631	768	70000	0.034	0.101	0.116

Alexa Fluor® 標識 CD抗体

次の表は、フローサイトメトリー（FACS）で使用可能な AlexaFluor®標識抗ヒトCD抗体の蛍光特性の概要を示しています。

▼表6. Alexa Fluor® 標識CD抗体　※クリックで開閉

標識	Ex (nm)	Em (nm)	ε	φ	CF 280 nm
Alexa Fluor® 350	343	441	19000	N/D	0.19
Alexa Fluor® 488	499	520	73000	0.92	0.11
Alexa Fluor® 555	553	568	155000	0.1	0.08
Alexa Fluor® 594	590	618	92000	0.66	0.56
Alexa Fluor® 647	650	671	270000	0.33	0.03
Alexa Fluor® 680	681	704	183000	0.36	0.05
Alexa Fluor® 700	696	719	205000	0.25	0.07
Alexa Fluor® 750	752	776	290000	0.12	0.04

従来の蛍光標識CD抗体

次の表は、フローサイトメトリー（FACS）で使用可能な従来の蛍光標識抗ヒトCD抗体の蛍光特性の概要を示しています。

▼表7. FITC、TRITC、その他従来の標識 CD抗体　※クリックで開閉

標識	Ex (nm)	Em (nm)	ε	φ	CF 280 nm
Pacific Blue™	404	455	46000	0.78	0.2
FITC	491	516	73000	0.79	0.254
Pacific Orange™	400	551	25000	N/D	0.6
TRITC	544	570	85000	0.1	0.34

PE、APC、PerCP およびタンデム蛍光標識CD抗体

次の表は、フローサイトメトリー（FACS）で使用可能なフィコエリトリン (PE)、アロフィコシアニン (APC)、PerCP、およびタンデム蛍光標識抗ヒトCD抗体の蛍光特性の概要を示しています。フィコビリタンパク質は、モル吸光係数が高く、量子収率が高いため、特徴的に明るくはありません。これは、存在量の少ないターゲットをイメージングするときに適した品質です。ただし、フィコビリタンパク質は急速に光退色するため、顕微鏡検査には推奨されません。

▼表8. PE、APC、PerCP 及びタンデム蛍光標識CD抗体　※クリックで開閉

標識	Ex (nm)	Em (nm)	ε	Laser Line (nm)
PE	566	574	1960000	488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-Texas Red®	567	615	1960000	488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-Alexa Fluor® 610	567	627	1960000	488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-Cy5®	565	666	1960000	488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-iFluor™ 647	569	666	1960000	488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-Alexa Fluor® 700	566	721	1960000	488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-Cy7®	566	778	1960000	488 nm, 532 nm, 561-568 nm
PE-iFluor® 750	566	778	1960000	488 nm, 532 nm, 561-568 nm
APC	651	660	700000	633-647 nm
APC-iFluor® 700	651	710	700000	633-647 nm
APC-Cy7®	651	779	700000	633-647 nm
APC-Alexa Fluor® 750	651	785	700000	633-647 nm
APC-iFluor® 750	651	791	700000	633-647 nm
PerCP	477	678	350000	488 nm
PerCP-Cy5.5	489	679	350000	488 nm