安定化２本鎖を有する強力なマイクロRNA阻害核酸 CL-AMO, anti-microRNA oligonucleotides

マイクロRNA（miRNA）は18〜23塩基の内在性ノンコーディングRNAの一種で、メッセンジャーRNA（mRNA）の非翻訳領域に結合して遺伝子発現の制御を担っています^{1, 2}。様々な遺伝子がmiRNAによる制御を受けるため、miRNAは様々な疾患とも密接に関わっています^{3, 4}。Anti-miRNA oligonucleotide（AMO）は標的miRNAと相補的な配列（アンチセンス配列）を有し、miRNAに結合してその機能を抑制する人工核酸です。細胞内の核酸分解酵素に対する耐性を獲得させるために、一般的にAMOには様々な化学修飾や二次構造が導入されています。

CL-AMOは、クロスリンクして安定化させた２本鎖（CL）をアンチセンス配列の両末端に接続した構造を持つ強力なAMOです⁵。他のAMOに比べて遥かに高い細胞内安定性とmiRNA阻害効果を有しています^{6, 7}。

本製品は、国立研究開発法人　産業技術総合研究所との共同研究により開発しました。

• 細胞内で高い安定性
• 高い標的miRNA特異性
• 高い標的miRNA結合力

細胞内で長期間安定的に作用

細胞のがん化と深く関係するmiR-21を標的とする CL-AMO（品番：CLAM-H21-5)を乳がん細胞株（MCF-7、ZR-75-1）にトランスフェクションし（終濃度：10 nM）、細胞増殖変化をWST-8法により測定しました。CL-AMOは9日間にわたって安定的に細胞増殖を抑制しました（図1A、B）。

高い標的特異性

MCF-7細胞に、miR-21を標的とするCL-AMO（品番：CLAM-H21-5)またはランダム配列を有するネガティブコントロールCL-AMO（品番：CLAM-NC1)をそれぞれトランスフェクションし（終濃度：20 nM）、細胞増殖変化をWST-8法で測定しました。miR-21を標的としたCL-AMOのみが増殖抑制効果を示しました（図2）。

図2.　miR-21を標的とするCL-AMOまたはネガティブコントロールCL-AMOをMCF-7細胞に終濃度が20 nMとなるようにトランスフェクションした場合の細胞数の変化。トランスフェクションした日を１とした相対値で表示。

低発現miRNAにも効果的

一般的に低発現miRNAの抑制効果は検出しにくいと考えられています。乳がん細胞における発現量が少ないとされるmiR-148aを標的とする様々なAMOをMCF-7細胞にトランスフェクションしたところ、CL-AMOのみが低濃度でも増殖抑制を示しました（図3）。

図3.　miR-148aを標的とするAMOを終濃度が20 nMもしくは200 nMとなるようにトランスフェクションしたMCF-7細胞の細胞数の変化。トランスフェクションした日を１とした相対値で表示。

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