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キナーゼを標的としたリード化合物のキネティクスを結合アッセイにより評価するプロファイリングサービス scanKINETIC™
DiscoverX社：キナーゼ阻害化合物の Association/Dissociation キネティクスを評価

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メーカー名：Eurofins DiscoverX Corporation

標的キナーゼに対するリード化合物の可逆的・不可逆的な結合様式の情報は、in vitroおよびin vivoにおける薬理学的作用を理解する上で非常に重要な鍵となります。共有結合する不可逆的阻害剤の中には、キナーゼ反応系に添加後洗浄しても数時間以上標的の阻害効果が続くものもあります。化合物の結合および解離についてのデータがなければ、これらの化合物の薬理学的作用を理解することはより困難になります。
DiscoverX社のscanKINETICモードは、 KINOMEscan™アッセイを基本原理とし、生化学的な手法によりキナーゼと化合物の平衡状態を解析し、化合物の可逆性および不可逆性の結合様式を評価します。

特長

● リード化合物のプロファイリングに最適

● Kd値の相互作用から“rapid”, “slow”/reversible(可逆), irreversible(不可逆) / association, dissociation を評価

● 希釈系列や反応時間はカスタムにて対応

● 標準納期：約4週間

● 表面プラズモン共鳴(SPR)と比較して、多数のキナーゼを網羅（特に、Atypicalやmutant kinase）

● タンパク質の精製工程が不要なため、安価で短納期

基本原理

KINOMEscan™の原理をご覧ください。

試験デザイン

1.　1キナーゼ、1化合物に対して試験条件の異なる4 Kd を測定することによりキネティクスを算出
2.　Kd値の相互作用から“rapid”, “slow”/reversible(可逆), irreversible(不可逆) / association, dissociation を評価
3.　キネティクスは室温で、1時間以内の平衡状態においてassociation、5時間以内で dissociation と定義

（Fig１）
Arm A：5時間の培養
Arm B：1時間の培養後に反応系を30倍希釈し、4時間の培養
Arm C：1時間の培養
Arm D：反応系を30倍希釈後に5時間の培養

試験データ例

（Fig2） KIT-sunitinib Dissociation Kinetics
可逆的阻害剤として知られているsunitinib と標的キナーゼkitの反応を評価した結果、Arm Aと Arm Bを比較するとKd値が30倍程度シフトしていた。また、Arm A及びCのKd値に差異がないことから、sunitinibはRapid associationかつReversibleな Rapid dissociationの反応を示す可逆的阻害剤であることが確認できる。

（Fig3）Wortmannin irreversible Kinetics
Fig2と同様に、不可逆的阻害剤であるwortmannin の標的キナーゼkitに対する反応をscanKINETICアッセイにて確認した。Arm A及びB及びCのKd値に差異がないことから、wortmanninはRapid associationを示すがIrreversibleな不可逆的阻害剤であることが確認できた。