創薬研究・クロマチン研究に 精製／リコンビナントヌクレオソーム

ヌクレオソームと相互作用するタンパク質の研究や、酵素スクリーニングアッセイの基質としてご利用いただける、精製／リコンビナントヌクレオソームです。

主な製品である、ビオチン標識された 601 配列DNAを含むヒトリコンビナントモノヌクレオソームには、下記の特長があります。

• 他社製品と比較して高純度
• ビオチン標識により、プレートやビーズなどの担体への固定化が促進され、ストレプトアビジンをベースにした検出が可能です
• 遊離DNA／ヒストンの混入がありません
• タグのついていない完全長のヒトヒストンを用いて、ヒストンテールにおける酵素反応やタンパク質結合の解析が可能です

ヌクレオソーム

ヌクレオソームは、クロマチンの基本的なサブユニットで、147 bp のDNAが巻きついたヒストンオクタマー（八量体）で構成されます。ヒストンオクタマーは、H3/H4テトラマーと2つのH2A/H2Bダイマーを含みます。ヌクレオソームは、様々な長さの「リンカー」DNAによって分離され、「リンカー」ヒストン（H1、H5）と結合することにより、高度にパッケージングされたクロマチンや染色体構造をとります。

601配列

1998年に Lowary と Widom によってSELEX法で同定された 147 bp の二本鎖DNAフラグメントで、ヒストンオクタマーに強い親和性を持つことから、in vitro でのヌクレオソーム再構成に有用です。

• 信頼性の高い結果
  厳しい品質管理基準により、ロット間の変動がわずかで、偽陽性／偽陰性のリスクが低減されています。
• 低コスト
  純度が高く、少量でアッセイが可能
• 偽陽性と偽陰性を大幅に低減
  高純度（>98%）なことから、一貫性のあるヒットを得られます。
• 生理学的に関連性のある基質
  創薬研究に最適な基質である、ヒトリコンビナントヌクレオソームを提供しています。

図1　DNAの電気泳動結果
ビオチン標識ヒトリコンビナントモノヌクレオソーム（品番： 16-0006）を、アガロースゲルで電気泳動し、エチジウムブロマイドで染色してDNAを可視化した。
レーン1： ヌクレオソームから抽出したDNA（100 ng）
レーン2： インタクトなヌクレオソーム（400 ng）
ヌクレオソームのレーンに遊離DNAが存在しないことに注目

図2　タンパク質の電気泳動結果
ビオチン標識ヒトリコンビナントモノヌクレオソーム（品番： 16-0006）（2 μg）を電気泳動し、CBB染色した。得られた結果は、ヒストンの純度を示す。分子量マーカーのサイズと、コアヒストンの位置（H2A、H2B、H3、H4）を示す。

図3　HeLa細胞から精製したヌクレオソームタンパク質の電気泳動結果
EpiCypher社の HeLa Mononucleosome（品番： 16-0002）から抽出したタンパク質を段階希釈し、他社のヌクレオソーム 5 μg から抽出したタンパク質と並べて電気泳動した（CBB染色）。他社のヌクレオソームには、主に非ヒストンタンパク質の混入が認められる。また、ヒストンを染色した結果を相対的に比較したところ、他社のヌクレオソーム 5 μg は、EpiCypher社の 0.6 - 1.3 μg に相当する。

E. coli で発現させたリコンビナントヒストンから形成された、ヒトヒストンオクタマー（ヒストン H2A、H2B、H3、H4、各２個ずつ）です。

HeLa細胞から精製したヒトモノヌクレオソームで、147 bp のDNAが巻きついたヒストンオクタマーです。

HaLa細胞から精製したヒトポリヌクレオソームで、各DNA断片上に平均 2-5 のヒストンオクタマーから構成されます。

E. coli で発現させたヒトリコンビナントヒストンから形成されたモノヌクレオソームです。DNAの 5’末端にビオチン-TEG が修飾されており、ヌクレオソームを用いた結合実験やプルダウンアッセイに最適です。

SELEX法により同定された、147 bp の二本鎖DNA断片です。ヒストンオクタマーに強い親和性を持つことから、in vitro でのヌクレオソーム再構成に有用です。断片の5'末端にビオチン基を持ち、ヌクレオソームを用いた結合実験やプルダウンアッセイに最適です。

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