スピンカラムタイプのエンドトキシン除去キット Norgen社　エンドトキシン除去キット

エンドトキシンは、リポ多糖とも呼ばれ、E.coliをはじめとするグラム陰性菌の細胞膜構成成分です。エンドトキシンはプラスミド精製中の可溶化ステップにおいて放出され、エンドトキシン感受性細胞株へのトランスフェクション効率を著しく低下させます。したがって、下流のアプリケーションにプラスミドDNAを使用する前に、プラスミドDNAからエンドトキシンを除去することが必要となる場合があります。Norgen社のEndotoxin Removal Kitは、エンドトキシンレベルを0.1 EU/mg DNA以下まで効率よく低減することが可能です。Norgen社の独自のレジンを用いたスピンカラムにより、効率良くプラスミドDNAからエンドトキシンを除去可能です。

• 迅速かつ簡単なプロトコール：スピンカラムタイプのため、複数サンプルから30分以内にエンドトキシンを除去可能
• エンドトキシンレベルは0.1 EU/mg DNA以下
• 90％以上のプラスミドDNA回収率
• 精製したDNAは様々なダウンストリームアッセイ（シーケンシング、クローニング、トランスフェクション等）に対応

• Buffer SK
• Wash Solution H
• Wash Solution F
• Elution Buffer I
• Endotoxin Removal Solution
• Precipitation Solution
• Spin Columns（assembled with collection tubes）
• Elution Tubes

図1．エンドトキシンを含まないプラスミドDNA
50μL容量中に11μgのプラスミドが存在し、エンドトキシンレベルが 8 EU/mg以上であるサンプルをNorgen社のEndotoxin Removal Kitを用いて精製した。1μLのインプットDNAと50μLの溶出DNAをそれぞれ1000倍希釈または10倍希釈し、100μLをレムルスアメーバ様細胞可溶化物試験に使用した。プラスミドDNAサンプルのエンドトキシンレベルはEndotoxin Removal Kit（Mini）により 8 EU/mg から ≦ 0.1 EU/mgまで低減できた。

図2．高いDNA回収率
50μL容量中に11μgのプラスミドが存在し、エンドトキシンレベルが 8 EU/mg以上であるサンプルをNorgen社のEndotoxin Removal Kitを用いて精製し、この操作を3回繰返しで行った。50μLの溶出DNAを分光光度計で定量した。Norgen社のEndotoxin Removal Kit（Mini）使用によるDNA損失はみられなかった。本キットを使用した場合、効率よくエンドトキシンが除去できただけでなく（図1参照）、プラスミドDNAの回収率もインプット量の90％以上を示した。

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