記事ID ： 11851

Grp78/BiPを高感度かつ迅速に検出 Grp78 測定ELISAキット

メーカー名：Enzo Life Sciences,Inc.

Grp78 測定ELISAキットは、細胞ライセートまたは血清中のGRP78を定量するための、競合ELISAキットです。ミスフォールドタンパク質、癌、神経変性疾患の研究に有用です。

背景

Grp78について

Grp78（Glucose-regulated protein）とは、BiP（binding immunoglobulin protein）としても知られ、小胞体に常在する分子シャペロンで、タンパク質のフォールディング及び集合、新しく合成されたペプチドの小胞体膜を通した輸送、カルシウム恒常性の調節、ミスフォールドされたタンパク質を分解するためのターゲッティングなどに関係しています。

また、GRP78は、PERK、IRE1、ATF6などの膜貫通型タンパク質の小胞体内腔のN-末端ドメインに結合し、これらのシグナルトンラスデューサーが変性タンパク質応答（unfolded protein response（UPR）；小胞体機能を正常に戻すために細胞内環境を変化させる適応応答）を惹起するのを防ぎます。

タンパク質のミスフォールドが起きた場合、タンパク質表面に露出した疎水性残基にGRP78が結合し、タンパク質の凝集、輸送、分泌を防ぎます。グルコース欠乏やウイルス感染などの細胞内ストレスが起こると、未フォールドタンパク質が急速に蓄積されます。この蓄積により、疎水領域に結合するGRP78がより多く必要になり、膜貫通シグナリングタンパク質からGRP78が解離し、その結果UPRが誘導されます。 GRP78が解離すると、PERKは一般的な翻訳を減少させ、更なるタンパク質合成を阻害します。ATF6とIRE1は、小胞体のフォールディング、GRP78を含むシャペロンタンパク質、小胞体関連分解（ERAD）を介したミスフォールドタンパク質の分解を促進するタンパク質をアップレギュレートします。URPの活性化によるGRP78の過剰発現は、代謝性疾患（炎症性疾患、神経変性疾患、癌）の病理に関係していると考えられています。

特長

迅速：2.5時間で、最大40サンプル（反復2回）の結果が得られます。
高感度：8.4ng/mLのGrp78/BiPタンパク質が確実に測定できます。
定量：ウェスタンブロット（半定量）より優れた完全定量結果が得られます。
簡単：サンドイッチアッセイフォーマットに比べてステップ数の少ない簡単プロトコールです。

構成内容

96ウェルマイクロプレート（ロバ抗ヒツジポリクローナル抗体でコート済み）
アッセイバッファー
GRP78（HRP標識）
GRP78抗体
GRP78スタンダード
抽出試薬
洗浄バッファー（20×）
TMB基質
停止液

使用例

サンプル	Average Net OD	GRP78 (ng/mL)
図1　試験結果の例
ブランク	0.042	-
B0	1.16	0
S1	0.05	4500
S2	0.17	900
S3	0.42	180
S4	0.8	36
S5	1.06	7.2
S6	1.12	1.44
計算式 Average Net OD = Average OD - Average NSB OD Percent Bound（B/B0） = Net OD/Net B0 OD × 100

図2　シクロスポリンAによるGRP78の誘導
Hela細胞を各濃度のシクロスポリンAで5時間処理した。未処理の細胞と共に抽出試薬で溶解し、本キットで分析した。結果は文献（Paslaru, L. et al. (1994)）と一致した。本キットでGRP78レベルの変化が検出・定量できることがわかった。