本キットは、遊離リン酸を検出する BIOMOL GREEN を組み合わせ、細胞内のカルシニューリン活性測定するキットです。カルシニューリンは、Ca2+/カルモジュリン依存性セリン/スレオニンタンパク質脱リン酸化酵素 (PP2B) です。アッセイ原理は、カルシニューリンがその基質としてよく知られているRIIリン酸化ペプチドを脱リン酸化し、遊離したリン酸を BIOMOL GREEN で比色定量することで酵素活性を測定します。
特長
- 放射性物質を使わないユニークな比色アッセイ
- 酵素活性、その阻害剤・モジュレーターのスクリーニングに有用
- ハイスルプットフォーマット
構成内容
- カルシニューリン酵素(ヒトリコンビナントタンパク質)
- カルモジュリン(ヒトリコンビナントタンパク質)
- 基質 (RIIリン酸化ペプチド)
- 2xアッセイバッファー
- EGTAバッファー
- 溶解バッファー
- プロテアーゼ阻害剤カクテル
- BIOMOL® Green 試薬
- リン酸スタンダード
- オカダ酸 (カルシニューリン阻害剤)
- 脱塩カラム/レジン
- 1/2量マイクロプレート
使用例
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図1. マウス脳から抽出した細胞内カルシニューリン活性
フレッシュなマウス脳から調製した抽出物のホスファターゼ活性を検討した。抽出物は、ゲルろ過を行う前に、プロテアーゼ阻害剤を含む溶解バッファーで 1:1 に希釈した。ゲルろ過の後およびホスファターゼアッセイの前に、抽出物を溶解バッファーで 1/25 に希釈した。反応は30℃で30分間行った。
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図2. ポジティブコントロールとしてのカルシニューリンのEGTA及びオカダ酸による影響
精製カルシニューリン(品番: BML-SE163-9090)ポジティブコントロールを用いて、EGTA およびオカダ酸(OA)の影響を検討した。CaN を様々なバッファー条件下で30℃で1時間インキュベートした。CaN 活性は EGTA バッファーによって阻害されるが、100 nM または 500 nM オカダ酸では阻害されない。
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Calcineurin Cellular Activity Assay Kit
細胞・組織抽出物用
品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
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Calcineurin cellular activity assay kit | ENZ | BML-AK816-0001 | 1 KIT [96 wells] |
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Calcineurin phosphatase assay kit
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Cypermethrin | ENZ | BML-PR100-0050 | 50 MG |
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Deltamethrin | ENZ | BML-PR101-0010 | 10 MG |
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FK506 [FK-506, Tacrolimus] | ENZ | ALX-380-008-M005 | 5 MG |
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Permethrin | ENZ | BML-PR103-0050 | 50 MG |
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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
※ 表示価格について
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