商品情報

記事ID : 14838
研究用

目的タンパク質の発現と可溶化に最適なtagの選択にExpresso® Solubility and Expression Screening System

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Expresso® Solubility and Expression Screening System は、タンパク質の発現量と溶解性を向上させることが実証された7種類の融合タグを含む、便利なスクリーニングキットです。

使用目的

本キットは、PCR による増幅、迅速なクローニング、様々な可溶性タグ(切断可能)がついた目的タンパク質の発現が可能な、オールインワンシステムです。Lucigen 社では、文献で報告された7種類の可溶性タグを、Expressioneering™ 技術と組み合わせることで、すぐにクローニングにご使用いただけるベクターセットを作製しました。7種類の可溶性タグ(および 6xHis タグコントロールベクター)により、タンパク質を迅速かつ同時に評価することができます。

pSOL™ ベクター

図1 pSOL™ ベクターは、目的遺伝子のシームレスクローニングが可能で、余分なアミノ酸の付加は起こりません。融合タンパク質は、TEV プロテアーゼ認識部位で切断できます。

特長

  • 1種類の PCR 増幅産物を使用して、複数のコンストラクトを同時に作製
  • TEV プロテアーゼで切断可能な融合タグを用いて、迅速かつ同時にタンパク質をスクリーニング
  • PCR による増幅からタンパク質発現まで、わずか4日間で行うことが可能

構成内容

各キット共通

  • pSol™ ベクター(融合タグ×7種類、His タグコントロールベクター×1)
  • コントロールインサート(ポジティブコントロール)
  • シーケンスプライマー
  • E. cloni® 10G Chemically Competent Cells (SOLOs)
  • 20% ラムノース溶液
  • 15% グルコース溶液

オプション

品番 A) SelecTEV™ プロテアーゼ B) Accura® High-Fidelity ポリメラーゼ
49060-1
49062-1
49064-1
49066-1

E. cloni®10G Chemically Competent CellsSelecTEV™ プロテアーゼ は別途ご購入いただくことも可能です。

ワークフロー

ワークフロー

Lucigen 社の Expressioneering™ 技術を利用すると、複数の融合タグによる目的タンパク質の発現および溶解性の向上を、従来よりも迅速かつ簡単にスクリーニングすることが可能です。1種類のアンプリコンを使用して、8種類の異なるクローン(融合タグ×7種類、His タグコントロール×1種類)を同時に作製し、可溶性と発現量をスクリーニングします。

Expressioneering™ 技術について

使用例

融合タグの効率は、タンパク質によって異なります。 本キットを使用することで、複数の実績のあるタグをすばやく簡単にスクリーニングし、目的タンパク質に最適なタグを見つけることができます。

使用例

図2 タグ融合タンパク質として E.coli で発現させた GH1 (Human Growth Hormone: ヒト成長ホルモン) の発現量と溶解性を評価した。タグ(SlyD、Tsf、SUMO、Bla、MBP)を融合したタンパク質は、His-コントロールタンパク質と比較して、溶解性が向上していることが示された(レーンS)。
T: トータルライセート、S: 可溶性画分、I: 不溶性ペレット

含まれる融合タグ

本キットには、ユニークな融合タグを含む7種類のベクターと、His タグコントロールベクターが含まれます。融合タグは、配列・サイズ・等電点などがそれぞれ異なります。各タグの特性を下表に示します。

# 融合タグ アミノ酸長 kDa pl(等電点) 概要
1 6xHis-AFV 113 13.5 5 Acidianus filamentous virus 1の推定タンパク質
2 6xHis-SlyD 210 22.7 5.2 FKBP タイプ ペプチジルプロリルイソメラーゼ
(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase)
3 6xHis-Tsf 297 32.2 5.7 E. coli 伸長因子
4 6xHis-SUMO 115 13.3 5.2 低分子ユビキチン様修飾因子
5 6xHis-Bla 381 41.3 4.4 βラクタマーゼ
6 6xHis-MBP 382 42.1 5.5 マルトース結合タンパク質
7 6xHis-GST 233 27.4 6.6 グルタチオンS-トランスフェラーゼ
8 6xHis Control 14 1.8 7 アフィニティタグ

 

SelecTEV™ プロテアーゼによる切断

 

本キットで発現させたタグ融合タンパク質は、Lucigen 社の SelecTEV™ プロテアーゼを用いて、タグを完全に切断することができます。

図3 SelecTEV™ プロテアーゼで切断した融合タンパク質の SDS-PAGE 解析(CBB 染色)。

図3 SelecTEV™ プロテアーゼで切断した融合タンパク質の SDS-PAGE 解析(CBB 染色)。
SelecTEV™ プロテアーゼ 10U 、融合タンパク質 30μg(トータル 100μL)を、30℃で1時間インキュベートした。
マーカー(レーンM)、SelecTEV™ プロテアーゼ(レーン1)、切断されていない融合タンパク質(レーン2)、切断された融合タンパク質と SelecTEV™ プロテアーゼ(レーン3)

Expresso® Solubility and Expression Screening System

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Expresso(R) Solubility and Expression Screening System詳細データ LUC 49060-1 24 RXN
¥233,000

■ Accura® High-Fidelity ポリメラーゼ 付属

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Expresso(R) Solubility and Expression Screening System + Accura(R) High-Fidelity Polymerase詳細データ LUC 49064-1 24 RXN
¥220,000

■ SelecTEV™ プロテアーゼ 付属

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Expresso(R) Solubility and Expression Screening System + SelecTEVTM Protease詳細データ LUC 49062-1 24 RXN
¥255,000

■ Accura® High-Fidelity ポリメラーゼ & SelecTEV™ プロテアーゼ 付属

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Expresso(R) Solubility and Expression Screening System + SelecTEVTM Protease and Accura(R) High-Fidelity Polymerase詳細データ LUC 49066-1 24 RXN
¥262,000

【オプション/単品】 SelecTEV™ プロテアーゼ

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
SelecTEVTM Protease詳細データ LUC 30810-1 1000 UNIT
販売終了
SelecTEVTM Protease詳細データ LUC 30810-2 5000 UNIT
¥137,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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