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最大12断片を1ステップでシームレスに結合 F1-X™ 次世代1ステップ Gibson Assembly® Master Mix

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メーカー名：Racer Biotechnologies LLC DBA Racer Biosciences

F1-X™は、制限酵素不要でスカー（継ぎ目）のないシームレスクローニングを実現するGibson Assembly®法（ギブソン・アセンブリ法）をベースとした、次世代のクローニング試薬です。Gibson Assembly®の発明者であるDan Gibson博士の監修のもと開発された本製品は、従来のシンプルさを継承しつつ、反応速度、正確性、および自動化への適合性を大幅に向上させています。
最大の特長は、単一のチューブで最大12個のDNA断片のクローニングが可能な点で、特に難易度の高いマルチフラグメント構築において卓越した性能を発揮します。

Gibson Assembly®法（ギブソン・アセンブリ法）の基本原理

Gibson Assembly®法（ギブソン・アセンブリ法）は、制限酵素やライゲーションの痕跡を残すことなく、複数のDNA断片を1ステップでシームレスに結合させることができます。
本手法では、各断片の末端に設計されたオーバーラップ（重複）配列を利用し、相同性のある本部位がガイドとなってアセンブリ（結合）を導きます。これらDNA断片をGibson Assembly® Master Mixと混合し、一定の温度（標準50℃）でインキュベートすることで反応が進行します。この等温環境下で、3 つの酵素活性（エキソヌクレアーゼ、ポリメラーゼ、リガーゼ）が協調的に作用し、最終的に化学結合された完全な二本鎖DNAが形成され、そのまま形質転換などの下流の工程に使用することが可能です。

図１：Gibson Assembly®法（ギブソン・アセンブリ法）の概要図

特長

F1-X™は、Gibson Assembly®法の化学反応をベースに、スピード、正確性、および柔軟性をさらに向上させています。

迅速かつ簡便：簡便な操作（混合・インキュベートのみ）により、最短15分で反応が完了します。
卓越したマルチフラグメント・アセンブリ：高い正確性と効率性を備え、複雑な多断片連結（最大12断片）においても優れた性能を発揮します。
目視可能なポジティブコントロール： GFPの蛍光により、クローニング効率を迅速かつ容易に測定できます。
微量対応・自動化適合： 2.5 µLまでの微量反応を検証済みで、ハイスループット化に最適です。

使用目的

プラスミド構築
ライブラリ構築
信頼性の高いマルチフラグメントクローニング

を必要とする合成生物学プロジェクト

構成内容と仕様

F1-X™ マスターミックス (2×)
F1-X™ ポジティブコントロール(2×)：４フラグメントのアセンブリによりGFP発現カセットを構築。GFPの蛍光により、クローニング効率を迅速かつ目視で確認可能。

パラメーター	範囲・条件
反応液量	標準20 µL（許容範囲：2.5-20 µL）
フラグメントサイズ	各フラグメントあたり 100 bp - 32 kb
フラグメント数	1反応あたり 2-12断片
全体の組み立てサイズ	合計最大 100 kb まで
オーバーラップ長（重複部分の長さ）	2-3断片の連結：20-40 bp ／ 4断片以上の連結：40 bp以上
反応条件	2-3断片：50℃、15分間／ 4-12断片：50℃、60分間
反応温度	標準50°C（許容範囲：50-56°C）
適合性・許容能	オーバーラップ部位のミスマッチに対応、未精製PCR産物も使用可能（≤20% v/v）
保存温度	-20°C

ワークフロー

特別な機器を使わずに、断片から検証済みの構造物までを3つのステップで作製できます。
【ステップ1】断片の混合：1本のチューブに断片とF1-X™マスターミックスを加える
【ステップ2】インキュベーション：50 ℃で15～60分間
【ステップ3】下流アプリケーションへ：コンピテントセルへの形質転換や無細胞系のタンパク合成等に使用可

製品データ

図2：競合他社製品とのクローニング精度の比較（Error-Free Clone Rate）
40 bpのオーバーラップを持つ、4フラグメントのアセンブリ実験において、エラーのないクローン（Error-Free Clone）が得られる割合を競合他社品と比較した。F1-X™は78.6%という最も高い正確性を示し、主要な競合製品（N社製品A、T社製品B、N社製品C）を大きく上回る性能を示した。

図3：断片数に応じた(a)クローニング効率と(b)コロニー収量
4個から11個のDNA断片を用いた際のアセンブリ性能を検証した。(a)クローニング効率においては、断片数に関わらず95～97%という極めて安定した高い効率を維持した。(b)平均コロニー収量においても、複雑な11フラグメント構成まで十分な数のコロニーが得られることが実証された。

図4：凍結融解の繰り返しに対する耐性と安定性
マスターミックスを5回凍結融解（5x FT）させた際の安定性を検証した。(a)コロニー数および(b)クローニング効率において、新鮮な状態（Fresh）と遜色ない極めて高い数値を維持した。特に(c)アセンブリの正確性については、算出されたエラー率が、材料であるDNA断片自体が本来持つエラー率（破線）を下回る水準で安定していた。これは、5回の凍結融解を経た後でも酵素活性が損なわれず、配列ミスを最小限に抑えた正確な結合が可能であることを示し、輸送時や保管時の環境変化に対しても高い堅牢性を備えていることが実証された。

Gibson Assembly® は Telesis Bio Inc. の登録商標です。

F1-X™ 次世代1ステップ Gibson Assembly® Master Mix

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
F1-X^TM Next-Gen Gibson AssemblyR Kit	RCB	F1XGA10R	10 RXN	￥29,000
F1-X^TM Next-Gen Gibson AssemblyR Kit	RCB	F1XGA50R	50 RXN	￥120,000
F1-X^TM Next-Gen Gibson Assembly^(R) Kit	RCB	F1XGA100R	100 RXN	￥220,000
F1-X^TM Next-Gen Gibson AssemblyR Kit	RCB	F1XGA250R	250 RXN	お問い合わせ