記事ID ： 36705

超遠心機不要のエクソソーム単離キット Fab-TACS® Exosome Isolation kit

カテゴリから探す > 分子生物 > miRNA > エクソソーム

メーカー名：IBA GmbH

アポトーシス小体（100-5,000 nm）や微小粒子（100-1,000 nm）などの他の細胞外小胞と部分的に重複するエクソソームのサイズ（30～150 nm）により、その単離は非常に困難です。現在用いられている手法は、超遠心分離法、サイズ排除クロマトグラフィー、フィルトレーション、ポリマーベースの沈降法です。用いるサンプルにより単離効率は様々で、他の粒子のコンタミネーション、回収率、単離に要する時間などにより使用できる手法が制限されます。エクソソーム表面マーカー特異的磁気ビーズによる単離法の開発は、精製過程を改良しましたが、磁気ビーズへの不可逆的な結合によりエクソソームの完全性を損ないます。Fab-TACS® エクソソーム単離技術は、サンプルに依存せず、高純度、未標識のエクソソームを迅速に単離可能です。

Fab-TACS®（Fab-based traceless affinity cell selection）は、Fabベースで細胞にダメージを与えず、かつ、磁力を用いないアフィニティクロマトグラフィーを用いたエクソソーム単離技術です。Twin-Strep tag付きの細胞表面（CD）抗原特異的なFab断片を用いており、エクソソームの捕獲・解放を行います。この技術により、無傷な生物学的機能を有するエクソソームを標準化された方法で再現性高く単離できます。エクソソームは、細胞培養上清、血清、血しょうなど様々なサンプルから単離できます。

図1. Fab-TACS®の概略図

原理・プロトコル概略

Twin-Strep tag付きのFab断片（Fab-Strep）溶液1mLをFab-TACS Gravityカラムに加える。
→ Fab-Strepがカラム内のStrep-Tactin※マトリクスに特異的に結合し、エクソソームが捕捉できる状態になります。
サンプル1mLをFab-TACS Gravityカラムにアプライする。
→ Fab-Strepによりエクソソームが捕捉され、不要な物質はカラムを通過します。
溶出バッファー（Biotin溶液）1mLをアプライする。
→ Strep-tagよりビオチンの方がStrep-Tactinとの親和性が高いため、ビオチンを添加することでエクソソームとFab断片が溶出します。溶出後、Fab-strepsはエクソソーム表面から自己解離します。

※Strep-Tactinはストレプトアビジンの改良タンパク質です。Strep-Tagと高い親和性を持ち、ビオチン－ストレプトアビジンに代わる最適な結合パートナーとしてStrep-Tag/Strep-Tactin Systemが開発されました。

構成品

Fab-TACS® Gravity column
（Capacity：5x10^10 targeted exosomes/column、10ml cell culture supernatant/column）
Fab-Strep（human CD9 or human CD81）
Biotin stock solution
Fab-TACS® Gravity Adapter

製品データ

超遠心分離なしで高品質エクソソームの単離

図2. 超遠心分離なしで高品質エクソソームの単離

他の細胞外小胞（EV）の混入を最小限に
小胞の粒子サイズは、分離されたエクソソームの品質を評価する上で重要な要素です。間葉系幹細胞（MSC）の細胞培養上清から分離された粒子の99%は、30～150 nmの範囲内でした（A）。これは、強いエクソソーム濃縮を示しています。これに対して、PEG沈殿法（B）で精製した後、エクソソームサイズの粒子は32%しか検出されず、より大きな細胞外小胞による混入が示唆されました。
エクソソームタンパク質を高含有
分離した粒子群に同サイズの非エクソソーム粒子が混入している可能性があるため、Fab-TACS®テクノロジーを使用してMSC上清からエクソソームを分離した後、マーカータンパク質CD63およびAlixの存在を確認しました。両方のタンパク質が精製粒子内に明確に存在し（C）、エクソソーム表現型が確認されました。
高い再現結果
MSCドナーによって細胞培養上清の組成は異なる場合があります。異なるMSCドナーから独立した分離精製されたエクソソームは、86 nmから90 nmの平均直径の範囲のサイズのものでした。得られた各粒子群の約94%が30～150 nmの粒子でした（D）。これは、高純度に加えて、Fab-TACS®エクソソーム分離技術の高い再現性を示しています。また、さまざまな実験を通じて同等のエクソソーム分離収率を示しています。
サンプルに依存しないエクソソーム分離
エクソソームの重要なソースには、血液や尿などのさまざまな人間の体液も含まれます。細胞培養上清からの分離と同様に、ヒトの血清からエクソソーム分離によって回収された粒子の96%は、30～150 nmの典型的なエクソソームサイズを示しました（E）。このことから、当社のFab-TACS®は様々なサンプルからエクソソーム分離が可能だということがわかります。

Fab-TACS® Exosome Isolation kit

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
CD9 Fab-TACS^(R) Exosome Isolation Kit, Human	IBA	6-3219-004	4 COLUMN	販売終了
CD9 Fab-TACS^(R) Exosome Isolation Kit, Human	IBA	6-3219-010	10 COLUMN	販売終了
CD81 Fab-TACS^(R) Exosome Isolation Kit, Human	IBA	6-3281-004	4 COLUMN	販売終了
CD81 Fab-TACS^(R) Exosome Isolation Kit, Human	IBA	6-3281-010	10 COLUMN	販売終了
CD9/CD81 Fab-TACS^(R) Exosome Isolation Starter Kit, Human	IBA	6-3295-004	4 COLUMN	販売終了
CD9 Fab-TACS^(R) Exosome Isolation Introductory Kit, Human	IBA	6-3296-002	2 COLUMN	販売終了
CD81 Fab-TACS^(R) Exosome Isolation Introductory Kit, Human	IBA	6-3297-002	2 COLUMN	販売終了