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ioGABAergic Neurons ヒトiPS細胞由来GABA作動性ニューロン　|　Bit Bio社

メーカー名：Bit Bio Limited

ioGABAergic NeuronsはヒトiPS細胞由来のGABA作動性ニューロンです。細胞には、ドキシサイクリンで転写因子の発現を誘導可能な「opti-ox」カセットが組み込まれており、細胞融解後、ドキシサイクリンを添加し培養することでGABA作動性ニューロンへ分化させます。

Wild type ioGABAergic Neurons に加え、疾患モデル ioGABAergic Neuronsが新登場!
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　・アルツハイマー病モデル

使用目的

疾患研究
共培養研究
カルシウムイメージング
トランスクリプトーム解析
微小電極アレイ（MEA）解析

特長

純度が高い：99％以上の細胞が主要なGABA作動性ニューロンマーカーを発現する。
一貫性：ロット間のばらつきが少ない。
共培養可能：ioGlutamatergic Neurons やアストロサイトと共培養し、機能的神経ネットワークを形成する。

仕様

品質確認方法
細胞由来	ヒト iPS 細胞
ドナー	白人成人男性（皮膚繊維芽細胞）
包装	Small: >3 x 10⁶ cells
品質確認方法	・免疫染色・ RT-PCR
推奨播種密度	150,000 cells/cm²
使用可能なプレート	6、12、24、96、384 well plate

細胞播種後、短期間で分化・成熟させることが可能

本製品はGABA作動性ニューロンの前駆細胞として提供され、推奨培地を用いて培養することで急速に成熟します。bit.bioでの誘導後、お客様には2段階の生成プロトコールを実施していただきます。まず、ドキシサイクリンを添加した推奨培地で3日間の安定期間を経て、その後、細胞を成熟させるメンテナンス期間に入ります。細胞は3日目から使用可能です。

製品データ

細胞の形態

培養後、細胞には急速な形態変化が認められた。3日目にニューロンが確認され、10日目には神経ネットワークが確認された。（100X）

マーカータンパク質の発現

培養12日目の細胞に対して、神経マーカーであるMAP2（赤）とGABA（緑）を用いて免疫蛍光染色を行った。その結果、すべてのMAP2陽性ニューロンがGABAを発現していることが確認された。

ioGABAergic Neuronsの純度とニューロンマーカーの評価

(A)

(B)

(C)

(A,B) 培養0 、7、14日目の細胞にシングルセルRNA-seqを実施した。7日までに、99%以上の細胞で主要なGABA作動性ニューロンマーカー（GAD1、GAD2、SLC32A1 [VGAT]、DLX2、DLX5）および神経マーカー（MAP2）の発現が確認された。
(C) 14日目までに、非GABAニューロン系のマーカー（TH、TPH1、CHAT、SLC17A6[VGLUT2]、SLC17A7[VGLUT1]、SLC18A3[VACHT]）の発現はほとんど見られなくなった。

ロット間の一貫性

培養1日目および12日目の細胞に対して、3つの独立したロットでバルクRNA-seqを実施した。その結果、各日数のロット間でクラスターが非常に近く、高い一貫性が示された。差次的遺伝子発現解析によると、12日目のロット間で発現が異なる遺伝子は全体の1%未満（25000個中5個以下）だった。

ioGABAergic Neuronsと、ioGlutamatergic Neuronsおよびアストロサイトの共培養による機能的神経ネットワークの形成

(A,B) 様々な細胞数のioGABAergic Neurons と固定した細胞数のioGlutamatergic Neurons およびiPS 細胞由来アストロサイトを48 ウェルプレートに播種し、共培養した。コントロールとして、ioGABAergic Neurons＋アストロサイトおよびioGlutamatergic Neurons＋アストロサイトを用意した。
(C) ioGlutamatergic Neuronsとアストロサイトによる共培養は、ネットワークバーストあたりのスパイク数から示されるように、最も活発な同期神経ネットワーク活動が観察された。しかし、ioGABAergic Neuronsを共培養に加えると、細胞数に応じて興奮性の活動が抑制された。また、ioGABAergic Neuronsとアストロサイトによる共培養ではバーストは見られなかった。これらの結果から、ioGABAergic Neuronsが高純度であり、興奮性ニューロンが含まれていないことが示された。
(D) どの群においても25日目まで自発的な活動が増加し、その後プラトーに達した。

Wild type ioGABAergic Neurons

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
ioGABAergic Neurons - Human iPSC-derived GABAergic neurons, Human	BIT	IO1003S	1 VIAL [3 x 10^6 cells/vial]	お問い合わせ

アルツハイマー病モデルioGABAergic Neurons

ioGABAergic Neurons（品番：IO1003）のAPP遺伝子にV717I変異を導入しています。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
ioGABAergic Neurons APP V717I/V717I (CL59)	BIT	IO1081S	1 VIAL [3 x 10^6 cells/vial]	お問い合わせ
ioGABAergic Neurons APP V717I/V717I (CL70)	BIT	IO1082S	1 VIAL [3 x 10^6 cells/vial]	お問い合わせ
ioGABAergic Neurons APP V717I/WT (CL65)	BIT	IO1084S	1 VIAL [3 x 10^6 cells/vial]	お問い合わせ
ioGABAergic Neurons APP V717I/WT (CL54)	BIT	IO1085S	1 VIAL [3 x 10^6 cells/vial]	お問い合わせ