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記事ID : 41673
研究用

Cas9タンパク質/gRNA導入試薬 / ゲノム編集専用トランスフェクション試薬GenomONE™-GE トランスフェクション試薬

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GenomONE™-GE は免疫細胞等の一般的なトランスフェクション試薬では導入が難しい細胞にもCas9タンパク質及びgRNAを導入することができるゲノム編集専用トランスフェクション試薬です。
※Plasmid DNAを用いてCas9及びgRNAを発現させる場合は、GenomONE™-GX をご使用ください。

特長

  • CRISPR-Cas9システムをベースとしたゲノム編集専用のトランスフェクション試薬
  • 導入が難しい免疫細胞へのCas9タンパク質、gRNAの導入が可能
  • ドナーDNAをあわせて使用することでノックインが可能
  • 短時間・簡便な操作で導入ベクターの調製が可能

製品データ

Cas9タンパク質及びgRNAの導入
図1 Mouse primary T cellへのCas9タンパク質及びgRNAの導入
Mouse primary T cellにGenomONE™-GE、他社製品C、他社製品Tを用いてCas9タンパク質とsgRNA (2’OMe+PS修飾) をトランスフェクションした。2日後、T7 endonuclease I アッセイでゲノム編集効率を検証した。

gRNAの導入による細胞死の誘導
図2 ゲノム内の数千箇所を標的とするgRNAの導入による細胞死の誘導
Edit-R Lethal control gRNA (Horizon Discovery)とCas9タンパク質をGenomONE™-GE、他社製品C、他社製品Tを用いてmouse primary T cell、Jurkat細胞に導入した。2日後、 Edit-R Lethal control gRNAによって引き起こされた細胞死誘導の効果をWST-8法(細胞数測定、A450)にて評価した。 GenomONE™-GE はトランスフェクション困難なmouse primary T cell、Jurkat細胞においても、効率的にgRNAとCas9タンパク質を送達することができた。

Cas9タンパク質、gRNA、ドナーDNAの導入(ノックイン)
図3 Cas9タンパク質、gRNA、ドナーDNAの導入(ノックイン)
HeLa、U-937細胞にGenomONE™-GE を用いてCas9タンパク質、sgRNA、ssODN (制限酵素BamHI認識配列を含む66塩基) をトランスフェクションした。2日後、ターゲット遺伝子を含む断片をPCRで増幅後に制限酵素BamHI処理したサンプルをアガロースゲル電気泳動にて解析した。 トランスフェクション後、DNA-PK阻害剤で非相同末端結合(NHEJ)を抑制するNU 7441(Tocris)を処理するとノックイン効率が向上した。

Cas9タンパク質、gRNAの導入
図4 Cas9タンパク質、gRNAの導入
HeLa、RAW264.7、Jurkat、THP-1細胞にGenomONE™-GE を用いてCas9タンパク質とgRNA (2-part gRNAあるいはsgRNA)をトランスフェクションした。 2日後、T7 endonuclease I アッセイでゲノム編集効率を検証した。

化学修飾したsgRNAによるゲノム編集効率の改善
図5 化学修飾したsgRNAによるゲノム編集効率の改善
2’OMe+PS修飾したsgRNA、あるいは無修飾のsgRNAをCas9と共にU-937細胞に導入した。2日後、T7 endonuclease I アッセイでゲノム編集効率を検証した。
2’OMe+PS修飾したsgRNAでは、無修飾のsgRNAと比べ高いゲノム編集効率を達成した。

細胞毒性の軽減
図6 HEK-293細胞を浮遊状態でトランスフェクションすることによる細胞毒性の軽減
トリプシン処理で細胞を剥離、中和、遠心、新しい10%FBSを含む培地に懸濁した浮遊状態のHEK-293細胞にCas9タンパク質とPPIB標的sgRNAをトランスフェクションした後、遠心、新しい10%FBSを含む培地に懸濁し、48ウェルプレートに播種した。 2日後、T7 Endonuclease I アッセイでゲノム編集効率を検証した。
浮遊状態でトランスフェクションしたHEK-293細胞では、接着状態でトランスフェクションした場合と比べ融合細胞が減少しており、また細胞毒性が軽減した。

GenomONE™-GE トランスフェクション試薬

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
GenomONETM-GE ISK GG001 1 SET
[1 vial]
¥28,000
GenomONETM-GE ISK GG004 1 SET
[4 vial]
¥75,000
GenomONETM-GE ISK GG016 1 SET
[16 vial]
¥280,000
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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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