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記事ID : 36256
研究用

酵素阻害剤/ターゲットのスクリーニングに グランザイムA、グランザイムB 活性測定キット

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本商品はFRET基質を用いて、アポトーシスの主要な因子であるグランザイムAとグランザイムBの活性を蛍光検出するキットです。

背景

グランザイムとは?

グランザイムは、セリンプロテアーゼファミリーに属し、細胞傷害性T細胞(CTLs)より分泌されます。これらは標的細胞(ウイルス性または腫瘍細胞)に侵入し、標的細胞のアポトーシスを誘導して細胞死を惹起します。ヒトとマウスに存在する複数のグランザイムの中で、グランザイムAとBが最もよく研究されています。

グランザイムはどのように作用するか?

グランザイムA/Bはそれぞれ独立した機序(カスパーゼ/非カスパーゼ介在型)で標的細胞のアポトーシスを誘導します。グランザイムのリンパ球顆粒から標的細胞への侵入は、パーフォリン(孔形成タンパク質) を介して行われ、これはグランザイムA/Bに共通の経路となっています。一旦グランザイムが標的細胞膜へと侵入すると、両者は独立したメカニズムで細胞死を誘導します(図1)。

グランザイムAはカスパーゼ非依存性のメカニズムを介して作用する
図1:グランザイムAはカスパーゼ非依存性のメカニズムを介して作用する。ミトコンドリアにおけるROS産生、膜電位の低下、及びER-SET複合体活性の破綻を引き起こし、最終的には核に移行しssDNAニックを誘導する。
グランザイムBはBid等のpro-apoptotic mediatorに作用し、ミトコンドリアからのチトクロムCの放出を引き起こす。チトクロムCはカスパーゼに作用し、アポトソームの形成や細胞死を誘導する。また、グランザイムBは直接カスパーゼ経路を活性化させ、細胞死を誘導することも可能である。

特長

  • グランザイムA&Bの活性検出
  • 酵素阻害剤/ターゲットのスクリーニングに

仕様

アッセイキット グランザイム A グランザイム B
品番 AS-72260 AS-72261
品名 SensoLyte® 520 Granzyme A
Activity Assay Kit, Fluorimetric
SensoLyte® 520 Granzyme B
Activity Assay Kit, Fluorimetric
活性検出
阻害剤スクリーニング
速度 1時間アッセイ 1時間アッセイ
Ex/Em 490nm/520nm (緑色蛍光) 490nm/520nm (緑色蛍光)

製品データ

FRETを利用した本キットでは、グランザイムA & Bの活性検出ができ、低濃度領域でも高感度な検出が可能です。
FRET (FAM/QXL™ 520) 基質を図示した量の組換え型グランザイムAまたはBと共に60分間培養し、SpectraMax M5e (Molecular Devices) を用いて蛍光強度を測定しました。

グランザイムA活性を測定

図2:SensoLyte® 520 Granzyme A Activity Assay Kitを用いてグランザイムA活性を測定した。本アッセイでは3.125 ngの活性型グランザイムAが検出できた。

グランザイムB活性を測定

図3:SensoLyte® 520 Granzyme B Activity Assay Kitを用いてグランザイムB活性を測定した。

低濃度領域でのグランザイムB活性を測定

図4:SensoLyte® 520 Granzyme B Activity Assay Kitを用いて、より低濃度領域でのグランザイムB活性を測定した。本アッセイでは0.01ngの活性型グランザイムBが検出できた。

SensoLyte® Granzyme A活性測定キット

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
SensoLyte(R) 520 Granzyme A Activity Assay Kit, Fluorimetric詳細データ ASI AS-72260 1 KIT
¥150,000

SensoLyte™ Granzyme B 活性測定キット

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
SensoLyte(R) 520 Granzyme B Activity Assay Kit, Fluorimetric詳細データ ASI AS-72261 1 KIT
¥164,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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