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記事ID : 16370
研究用

10分以内で高速抽出・精製!10分間 ヒストン/DNA結合タンパク質抽出キット

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培養細胞や動物組織由来の分離細胞から、ヒストンおよびDNA結合タンパク質を10分以内に高い効率で抽出します。抽出したタンパク質は、SDS-PAGE、イムノブロット、ELISA、IP、タンパク質局在化および修飾研究にご使用いただけます。

101 Bio社 高速・簡便なタンパク質抽出キット

使用目的

ヒストンおよびDNA結合タンパク質は、染色体の構成、遺伝子調節および翻訳後修飾に重要な役割を果たしています。

ヒストン/DNA結合タンパク質抽出キットは、培養細胞や動物組織由来の分離細胞から、高い効率でヒストンとその他のDNA結合タンパク質を抽出します。酸や高塩濃度の抽出法を用いる他社製品では、塩基性タンパク質が選択的に抽出され、内在性コントロールが失われます。一方、本製品は他社製品と全く異なる原理でヒストンタンパク質を抽出します。したがって、ヒストンだけではなく、ヒストン修飾解析で内在性コントロールとして使用するためのDNA結合タンパク質も抽出することができます。

本製品は、0.5 X 106〜5 X 106 個の細胞から、高収量(1〜2.5 mg/mL)のタンパク質を10分以内に調製することができます

特長

  • 迅速 - 10分以内で抽出完了
  • 高収率・高濃度 - 1〜2.5 mg/mL
  • ヒストンとDNA結合タンパク質を高効率で抽出

構成内容

  • バッファーA
  • バッファーB
  • タンパク質抽出カートリッジ
  • キャップ付きコレクションチューブ

プロトコール

  1. バッファーAとフィルターカートリッジを取り付けたコレクションチューブを氷上で予備冷却します。
    0.5 X 106〜5 X 106 の培養細胞または組織から分離した細胞を、低速で5分間遠心します(500〜600xg)。
    動物組織を用いる場合の単一細胞懸濁液の調製には、 Tissue (Tumor) Dissociation/Single Cell Isolation Kit を推奨します。
  2. 細胞ペレットに1 mLのPBSを加えて再懸濁し、2.0 mLチューブに移します。3,000 rpmで2分間遠心後、上清を完全に除去します。
  3. 細胞ペレットに0.5mLのバッファーAを加えて再懸濁し、氷上で5分間インキュベートします。ボルテックスで混合し、14,000 rpmで2分間遠心します。上清(細胞質タンパク質を含む)を除去します。
  4. 表1を参照し、適切な量のバッファーBを加えて、10秒間ボルテックスします。直ちに予備冷却したフィルターカートリッジに移し、蓋をして14,000rpmで30秒間遠心します。フィルターカートリッジを廃棄します。コレクションチューブ内のフロースルーが、抽出されたヒストンおよびDNA結合タンパク質です(収量は、通常1〜2.5 mg/mL)。抽出物を免疫沈降(IP)に用いる場合、PBSTween やその他適切なバッファーで1:3に希釈してください。
    表1. サンプル細胞数とバッファーB量
    細胞ペレットの量(μL)対応細胞数(×106バッファーB量(μL)
    5 0.5 25〜50
    10 1.0 50〜100
    20 2.0 100〜150
    50 5.0 250〜300

使用例

異なる細胞から抽出したヒストンおよびDNA結合タンパク質のSDS-PAGE(18%)解析

異なる細胞から抽出したヒストンおよびDNA結合タンパク質のSDS-PAGE(18%)解析

トラブルシューティング

問題点解決方法
抽出タンパク質の収量が低い サンプルの初期細胞数を増やすか、バッファーBの量を減らしてください。
フィルターに液体が残る サンプルの初期細胞数を減らすか、バッファーBの量を増やしてください。

10分間 ヒストン/DNA結合タンパク質抽出キット

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Histone/DNA Binding Protein Extraction Kit (cells)詳細データ OBL P514-4 4 RXN
¥36,000
Histone/DNA Binding Protein Extraction Kit (cells)詳細データ OBL P514-25 25 RXN
¥90,000
Histone/DNA Binding Protein Extraction Kit (cells)詳細データ OBL P514-50 50 RXN
¥151,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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