Strep-tag® 融合タンパク質の精製に Strep-Tactin® resin

Strep-tag® 融合タンパク質の精製に最適な、Strep-Tactin® resinを各種ラインアップしております。

※Strep-Tactin® Sepharose®、Strep-Tactin® Superflow®のカタログ商品は、2024年10月末日に販売終了となります。
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Strep-Tactin® とは？

Strep-Tactin®は、最も安定なタンパク質の1つであるストレプトアビジンの改良タンパク質です。

ストレプトアビジンは、8Mの尿素又はグアニジン、0.5M NaOH、50％ホルムアミドなどの処理（1時間、37℃）に対して安定です。プロテアーゼ（ペプシン、パパイン、サブチリシン、サーモリシン、エラスターゼ）もストレプトアビジンを分解することができません（1：50 w/w、2時間、37℃）。SDS存在下で温度を60℃まで上げると、ストレプトアビジンはモノマーに分解し始めます。Strep-Tactin®もこの並外れた安定性を持ち、このためにカラムが長持ちし、3-5回繰り返し使用することが可能です。また、Strep-Tactin®の中性のpIにより、非特異的なタンパク質又は核酸の結合は最小限にとどまります。

Strep-Tactin® は、Strep-tag® IIペプチドと高いアフィニティで結合する

Strep-Tactin®は、Strep-tag® IIペプチドと高いアフィニティを持ち、ビオチン-ストレプトアビジンに代わる最適な結合パートナーとして、Strep-tag® / Strep-Tactin®システムが開発され、アフィニティクロマトグラフィーシステムとして幅広く利用されています。Strep-tag® II のStrep-Tactin®に対する結合アフィニティは、ストレプトアビジンに対するアフィニティより100倍近くも高くなっています。

• 生理活性リコンビナントタンパク質の精製
• デスチオビオチン溶出を用いた生理的な精製
• タンパク質凝集の防止
• 広範囲の界面活性剤、キレート剤、塩又は酸化還元条件に適用
• 毒性がありタンパク質の酸化を触媒する重金属イオンとの相互作用を妨害

アフィニティ精製によりタグのついたタンパク質はStrep-Tactin®に結合します。

PBSのような生理的バッファーに幅広い添加剤を組み合わせて使用できます。短い洗浄工程の後、デスチオビオチン（2.5mM）を添加した同じバッファーを流すことで、精製したリコンビナントタンパク質を溶出させることができます。デスチオビオチンは、ストレプトアビジンの天然リガンドであるビオチンの、安価で安定なアナログで、可逆的に結合します。この競合溶出が、特異性を高める2つ目の工程であり、類を見ない精製を可能にする要因の1つです。

本システムは安全で取り扱いやすく、カラムの再生と活性状態は、精製カラムの色の変化で視覚化されています。

E. coliで過剰発現させた「GFP-Strep-tag® II 融合タンパク質」を「Strep-Tactin®Sepharose®カラム」で精製
（左から右）新品（又は再生）カラム→ GFP-Strep-tag® II 融合タンパク質がStrep-Tactin®Sepharose®カラムの特異的に結合（非特異的タンパク質は少量のバッファーで速やかに流出）→デスチオビオチンの添加によりStrep-tag® II 融合タンパク質が溶出→HABA（黄色溶液）でデスチオビオチンを置換（HABAがStrep-Tactin®と複合体になって一旦赤くなる）→洗浄バッファーによりHABAを置換し、カラムを再生

Sepharose® は GE Healthcare 社の登録商標です。
Superflow® はSterogene Bioseparations 社の登録商標です。

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