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癌研究にもご利用いただけます！ヒト IFN-γ / グランザイム B FluoroSpot キット

メーカー名：Mabtech AB

ヒト IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot キットは、IFN-γと Granzyme B（グランザイムB）のいずれか（または両方）を分泌する細胞を検出するキットです。

ばらつきの少ないアッセイを短時間で行うことができる、プレコートプレートが含まれたキットもご用意しております（品番：FSP-0110-2）。

使用目的

FluoroSpot アッセイは、ELISpot アッセイを基にして開発されたアッセイで、比色法の代わりに蛍光法により検出します。数種類の検体を同時に検出できることが主な利点です。

本キットを使用することで、IFN-γと Granzyme B のいずれか、または、両方を分泌する細胞を検出することができます。

構成内容

［品番：FS-0110-2］

Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit

キャプチャーモノクローナル抗体（1-D1K）
キャプチャーモノクローナル抗体（GB10）
FITC標識検出モノクローナル抗体（7-B6-1）
ビオチン標識検出モノクローナル抗体（GB11）
抗FITC-490
SA-550
ポジティブコントロール（抗CD3 モノクローナル抗体）
抗CD28 モノクローナル抗体（CD28-A）
蛍光エンハンサー
FluoroSpot プレート

［品番：FSP-0110-2］プレコートプレート入り

Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit, pre-coated

FITC標識検出モノクローナル抗体（7-B6-1）
ビオチン標識検出モノクローナル抗体（GB11）
抗FITC-490
SA-550
ポジティブコントロール（抗CD3 モノクローナル抗体）
抗CD28 モノクローナル抗体（CD28-A）
蛍光エンハンサー
プレコート FluoroSpot プレート（モノクローナル抗体 1-D1K および GB10）

製品データ

図1
ヒトPBMC（末梢血単核球）（250,000 cells/well）を CEF ペプチドプール（品番：3615-1）で48時間刺激し（または刺激なし）、IFN-γ、Granzyme B を分泌する細胞の数を FluoroSpot により解析した。FITC（IFN-γ）、Cy3（Granzyme B）のオーバーレイ画像から、両方を分泌する細胞を、スポットの位置を基に同定した。スポットの分析は、AID（Autoimmun Diagnostika GmbH）社の iSpot スペクトルリーダーを用いて行った。

アプリケーション

ELISpot と FluoroSpot は癌研究に利用できます

腫瘍特異的T細胞の検出および解析
腫瘍抗原の同定およびエピトープマッピング
ワクチンにより誘導されたT細胞・B細胞応答のモニタリング

腫瘍反応性T細胞を高感度に検出

T細胞は、抗原認識の結果、刺激されてサイトカインを産生し、活性化マーカーを発現します。ELISpot アッセイでは、このサイトカインの誘導を利用して、各細胞から分泌されたサイトカインをキャプチャーして検出します。ELISpot は、細胞 100,000 個の中から活性化された少数の細胞を検出できる高感度な方法で、通常は非常に低頻度でみられる腫瘍特異的T細胞の研究に最適です。ELISpot と同じ原理に基づいて開発された FluoroSpot アッセイは、蛍光検出を利用しており、数種類のサイトカインを同時に検出できます。従って、T細胞の解析に適しており、必要な細胞数もより少なくて済みます。

さらに、ELISpot を利用して、ドナーの腫瘍細胞のMHC分子から溶出したペプチドに対するT細胞反応性のスクリーニングを行うことで、ワクチンの開発に適した新しいターゲット抗原を同定することができます。

このような研究のほとんどで、T細胞の活性化マーカーとして IFN-γ を用いられていますが、T細胞の殺傷能力を反映することから、Granzyme B や Perforin なども用いられています。FluoroSpot アッセイの導入により、腫瘍特異的T細胞のサイトカインプロファイルを効果的に検討したり、多機能性T細胞を解析することが可能になりました（図2参照）。多くの腫瘍抗原が「自己」抗原であることから、IL-10 や TGF-βなどのサイトカインを分泌する調節性T細胞の研究も興味深いと考えています。

図2
ヒトPBMC（末梢血単核球）（125,000 cells/well）を、2種類のCMVペプチドで40時間処理し、IFN-γ および Granzyme B を分泌する細胞を FluoroSpot により解析した。

参考文献

Casey R., et al. Enumeration of functional T-cell subsets by fluorescence-immunospot defines signatures of pathogen burden in tuberculosis PloS one 5 e15619, 2010
Krotova O., et al. Consensus HIV-1 FSU-A Integrase Gene Variants Electroporated into Mice Induce Polyfunctional Antigen-Specific CD4+ and CD8+ T Cells PLoS One 8 e62720, 2013
Sridhar S., et al. Predominance of heterosubtypic IFN-gamma-only-secreting effector memory T cells in pandemic H1N1 naive adults European journal of immunology 42 2913, 2012
Öhrmalm L., et al. Decreased functional T lymphocyte-mediated cytokine response in patients with chemotherapy-induced neutropenia Journal of internal medicine In press, 2013

ヒト IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot キット

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit, Human	MAB	FS-0110-2	1 KIT [2 plates]	販売終了
IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit, Human	MAB	FS-0110-10	1 KIT [10 plates]	販売終了

プレコートプレート入り

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot PLUS, Human	MAB	FSP-0110-2	1 KIT [2 plates]	販売終了
IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot PLUS, Human	MAB	FSP-0110-10	1 KIT [10 plates]	販売終了