iFluor™ 790 - ICG や Alexa Fluor® 790 の優れた代替蛍光試薬
図2.
HL-60細胞を抗ヒトHLA-ABC（W6/32 mAb）と共に（赤、＋）、または含まずに（緑、-）インキュベートし、続いて iFluor™ 790ヤギ抗マウスIgG結合体（品番16790）を添加してインキュベートした。蛍光シグナルは、ACEA NovoCyteフローサイトメーターを用いて、APC-Cy7チャンネルでモニターされた。
iFluor™ 790 は、インドシアニングリーン（ICG）、Alexa Fluor® 790、IRDye® 800 とスペクトル的に類似した、最も明るい近赤外色素です。
iFluor™ 790 の優れた水溶性と耐塩性、pH 非感受性蛍光、光安定性シグナル生成は、高密度標識用途、ウェスタンブロッティングおよび免疫細胞化学 (ICC) アッセイ、さらにはタンパク質アレイ、顕微鏡、in vivo画像、IR光プローブ開発にも優れています。iFluor™ 790 の発光は、Cy5 (品番151) や Cy7 (品番161) 、アロフィコシアニン (ReadiUse™ APC, 品番2503) などの一般的に使用される遠赤色蛍光体とよく分離されており、マルチカラー分析に適しています。また、小動物の in vivo イメージングや、LI-COR® Odyssey® 赤外線イメージングシステムを用いた2色ウェスタンブロットなど、近赤外線検出を必要とするイメージングアプリケーションに適しています。
iFluor™ 790 はさまざまな反応性色素の形態で提供されており、ReadiLink™ ラベリングキットでは、タンパク質、抗体、ペプチド、ヌクレオチドに標識するできる簡単な標識キットとして提供しています。その他にも、iFluor™ 790 を、細胞の標識や検出用に最適化されたさまざまな抗体、ストレプトアビジン、増幅基質に結合させたものも提供しています。
iFluor™ 790 と従来試薬の比較
| 蛍光物質 |
Ex max |
Em max |
ε |
φ |
CF260 nm |
CF280 nm |
| iFluor™ 790, SE |
786 nm |
811 nm |
250,000 |
0.13 |
0.1 |
0.09 |
| ICG-OSu |
788 nm |
813 nm |
230,000 |
0.04 |
0.112 |
0.072 |
| Alexa Fluor®790、NHS Ester |
784 nm |
814 nm |
260,000 |
Not Listed |
0.09 |
0.08 |
| IRDye® 800 CW NHS Ester |
774 nm |
789 nm |
240,000 |
Not Listed |
0.03 |
0.03 |
ε = extinction coefficient at their maximum absorption wavelength. The units of extinction coefficient are cm-1M-1.
φ = fluorescence quantum yield in aqueous buffer (pH 7.2).
CF260 nm is the correction factor used for eliminating the dye contribution to the absorbance at 260 nm.
CF280 nm is the correction factor used for eliminating the dye contribution to the absorbance at 280 nm (for peptides and protein labeling).
インドシアニングリーンと赤外蛍光イメージングの組み合わせは、アッセイ感度を大幅に向上させます。700〜1000 nmの赤外波長域では生体分子の吸収が少ないため、光散乱と自家蛍光の両方が劇的に減少します。その結果、バックグラウンドの干渉が少なく、S/N比が高いため、検出感度が向上します。
AAT Bioquest社では、タンパク質、抗体、ペプチド、その他の生体分子を赤外蛍光で標識するためのスルホン化、非スルホン化、およびPEG修飾インドシアニングリーン誘導体や反応性色素を幅広く取り揃えています。インドシアニングリーン反応性色素には、以下のものがあります。
- OSu：1級および2級アミン（-NH2）の標識に使用
- マレイミド：遊離スルフヒドリル基（-SH）を有する生体分子の標識に使用
- アミン：カルボニル基（例：アルデヒド、カルボキシ基）を有する生体分子の標識に使用
- アルキンとアジド：クリックケミストリーにより生体分子を標識するために使用
- ヒドラジド：シッフ塩基化学による生体分子の標識に使用
非スルホン化インドシアニングリーン
非スルホン化インドシアニングリーンの誘導体は、水への溶解度が非常に低いため、有機媒体での応用に適しています。これらの誘導体は、効率的に生体分子を標識するために、5〜20 % の DMF や DMSOなどの有機共溶媒を使用する必要があります。インドシアニングリーン誘導体で生体分子を標識する場合、まず色素を有機溶媒に溶解し、適切な水系バッファーを用いて生体分子の溶液に添加する必要があります。
スルホン化インドシアニングリーン
スルホン化インドシアニングリーン誘導体は、スルホ基を持ち、水溶液への溶解を容易にします。荷電スルホ基の添加により、遊離色素分子や高濃度ラベル化コンジュゲートの凝集を抑制することができます。スルホン化インドシアニングリーン色素は、水溶性が高く、標識の際に有機共溶媒を使用する必要がありません。
PEG修飾インドシアニングリーン
PEG修飾（またはPEG化）インドシアニングリーン誘導体は、ポリエチレングリコール（PEG）からなるスペーサーアームを含んでいます。このスペーサーにより、非電荷の反応性基を持つインドシアニングリーン誘導体を可溶化したり、電荷の反応性基を持つインドシアニングリーン誘導体を更に可溶化することができるようになります。また、インドシアニングリーン色素をPEG修飾することにより、インドシアニングリーン色素の疎水性を高め、非特異的結合を大幅に減少させることが可能です。
| 品名 |
Ex/Em(nm) |
分子量 |
反応性 |
修飾 |
| Indocyanine Green |
788/813 |
774.96 |
Plasma Proteins |
Non-Sulfonated |
| ICG-Xtra-OSu |
788/813 |
1232.62 |
Amine(-NH2) |
None |
| ICG-Sulfo-OSu |
788/813 |
930.07 |
Amine(-NH2) |
Sulfonated |
| ICG-Sulfo-EG8-OSu |
788/813 |
1353.57 |
Amine(-NH2) |
Sulfonated and PEGylated |
| ICG-Sulfo-EG4-OSu |
788/813 |
1177.36 |
Amine(-NH2) |
Sulfonated and PEGylated |
| ICG-PEG12-OSu |
788/813 |
1427.73 |
Amine(-NH2) |
PEGylated |
| ICG-OSu |
788/813 |
828.03 |
Amine(-NH2) |
Non-Sulfonated |
| ICG Maleimide |
788/813 |
853.09 |
Sulfhydryl or Thiol(-SH) |
Non-Sulfonated |
| ICG hydrazine |
788/813 |
973.04 |
Schiff Base Chemistry |
Sulfonated |
| ICG azide |
788/813 |
799.05 |
Click Chemistry |
Sulfonated |
| ICG-ATT |
788/813 |
760.49 |
Amine(-NH2) |
Non-Sulfonated |
| ICG amine |
788/813 |
1001.08 |
Carbonyl(-COOH) |
Non-Sulfonated |
| ICG alkyne |
788/813 |
768.03 |
Click Chemistry |
Sulfonated |
| ICD acid |
788/813 |
844.98 |
Amine(-NH2)and -OH |
Non-Sulfonated |
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