ioMicroglia ヒトiPS細胞由来ミクログリア（男性/女性）｜Bit Bio社

細胞播種後、短期間で分化・成熟させることが可能

本製品はミクログリアの前駆細胞として凍結保存した状態で提供され、推奨培地で培養することにより急速に成熟します。bit.bioでの誘導後、お客様には3段階の生成プロトコールを行っていただきます。まずドキシサイクリンを添加した推奨培地で24時間の安定化、次に9日間の成熟、そして最後に使用可能な状態の維持工程です。細胞は培養10 日目から使用できます。

細胞の形態

重要な分岐形態は解凍後4日目以内に現れて、10日目まで続いた（100X）。

表現型マーカーの発現

培養10日目のioMicrogliaにおいて、DAPI染色と免疫蛍光染色を用いてMERGEを作成した。DAPIで細胞核を染色し、特異的な抗体を用いてP2RY12、IBA1、およびTREM2を染色した。

ioGlutamatergic neurons と ioMicroglia の共培養

培養10日目の ioGlutamatergic neurons に、培養１日目もしくは10日目の ioMicroglia を播種して共培養を確立した。共培養８日目に免疫蛍光染色を行ったところ、ミクログリアのマーカーであるIBA１と神経マーカーであるMAP２の発現が示された。

細胞の形態

重要な分岐形態は解凍後4日目以内に現れて、10日目まで続いた（100X）。

表現型マーカーの発現

培養10日目のioMicrogliaにおいて、DAPI染色と免疫蛍光染色を用いてMERGEを作成した。DAPIで細胞核を染色し、特異的な抗体を用いてP2RY12、IBA1、およびTREM2を染色した。

男性由来ドナーとの相違

女性ドナー由来 ioMicroglia は、男性ドナー由来 ioMicroglia とは異なるレベルの貪食作用を示す。

3つの独立したロットから採取した女性ドナー由来 ioMicroglia および単一ロットから採取した男性ドナー由来 ioMicroglia にpHrod™ RED で標識したザイモサン粒子を添加した。その後、24時間に渡ってサイトカラシンDを添加した条件と、添加していない条件を比較した。その結果、女性ドナー由来 ioMicroglia は、男性ドナー由来 ioMicroglia と比較して貪食の割合が高かった。

女性ドナー由来の ioMicroglia は、男性ドナー由来の ioMicroglia とは異なる炎症誘発性サイトカイン反応を示す。

３つの独立したロットから採取した女性ドナー由来 ioMicroglia および単一ロットから採取した男性ドナー由来 ioMicroglia を、LPS (100 ng/ml) および IFNɣ (20 ng/ml) で 24 時間刺激した。その結果、女性ドナー由来 ioMicroglia は、男性ドナー由来 ioMicroglia と比較して IL-8 および IL-1β サイトカインの分泌レベルが高く、 IL-12p70 サイトカインの分泌レベルが低かった。

ioGlutamatergic neurons と ioMicroglia の共培養

培養10日目の ioGlutamatergic neurons に、培養１日目もしくは10日目の ioMicroglia を播種して共培養を確立した。共培養８日目に免疫蛍光染色を行ったところ、ミクログリアのマーカーであるIBA１と神経マーカーであるMAP２の発現が示された。