記事ID ： 14853

未分化状態を維持したまま長期間の培養が可能脂肪由来幹細胞培養用培地 KBM ADSC-1＆2

メーカー名：コージンバイオ株式会社

KBM ADSC-1

脂肪由来幹細胞培養用培地 KBM ADSC-1＆2 は、脂肪由来幹細胞（ADSC）の未分化状態を維持したまま^（＊）長期間の培養が可能です。

KBM ADSC-1 は、5% FBS を含む Ready-to-Use の培地です。
KBM ADSC-1 から FBS を除いた KBM ADSC-2 も販売しております。

^（＊）脂肪、骨、軟骨への分化を確認済み

使用目的

分化誘導（脂肪、骨、軟骨など）や脂質生産の研究にご使用いただけます。

培養例

KBM ADSC-1 を使用した培養例

図1 継代培養時の増殖曲線

図2 継代培養時のPDT（population doubling time）の変化

表1　継代培養時の各種表面マーカーの割合
（％）	P5	P6	P7
CD29	100	100	100
CD44	100	100	100
CD73	100	100	100
CD90	99.6	99.5	99.2
CD105	99.5	99.5	97.3

【培養条件】

細胞： ADSC（市販 P1 凍結細胞）
容器：細胞培養用６穴プレート（Corning社　品番： 3516）
培養：
4.75×10⁴ 個の細胞を細胞培養用6穴プレートに播種。培養3日目に細胞をカウントし、継代およびフローサイトメトリー法により表面マーカーを解析した。

図3
(a) P3 培養3日目の ADSC
(b) P5 脂肪分化誘導後7日目の細胞（Oil Red O 染色）
(c) P5 骨分化誘導後21日目の細胞（Alizarin Red S 染色）
(d) P3 軟骨分化誘導後28日目の細胞（Alcian Blue 染色）

【培養条件】

細胞： ADSC（市販 P1 凍結細胞）を KBM ADSC-1 で2継代培養した細胞
容器：細胞培養用24穴プレート（FALCON社品番：353047）
培養：
- 脂肪
  6.25×10⁴ 個の細胞を細胞培養用24穴プレートに播種。培養用培地（D-MEM(H) ＋ 10% FBS ＋ 1mM ピルビン酸Na）
  培養1日目に KBM Adipogenic-DM（仮）にて分化誘導を開始し2～3日ごとにメディウムチェンジを行い培養7日目にOil Red Oにより染色。
- 骨
  6.25×10⁴ 個の細胞を細胞培養用24穴プレートに播種。培養用培地（D-MEM(H) ＋ 10% FBS）
  培養1日目に KBM Osteogenic-DM1(仮)にて分化誘導を開始し2～3日ごとにメディウムチェンジを行い培養21日目に Alizarin Red S により染色。
- 軟骨
  6.25×10⁴ 個の細胞を細胞培養用24穴プレートに播種。培養用培地（D-MEM(H) ＋ 10% FBS）
  培養1日目に一般的な軟骨分化誘導培地にて分化誘導を開始し3～4日ごとにメディウムチェンジを行い培養28日目に Alcian Blue により染色。

KBM ADSC-2 を使用した培養例

図4 継代培養時の増殖曲線

図5 継代培養時のPDT（population doubling time）の変化

表2　継代培養時の各種表面マーカーの割合
（％）	Medium	P3	P4	P5	P7	P8
CD29	FBS	99.9	99.2	98.9	99.9	99.6
CD29	HS	99.7	97.9	99.2	99.7	99.9
CD44	FBS	99.8	100	100	100	99.9
CD44	HS	100	99.9	100	100	99.9
CD73	FBS	99.9	99.8	99.9	99.9	100
CD73	HS	99.8	99.7	99.5	99.9	99.7
CD90	FBS	100	99.9	99.6	99	99.9
CD90	HS	99.8	99.6	99.7	99.7	99.9
CD105	FBS	99.8	99.6	99.8	99.8	99.3
CD105	HS	99.9	99.7	99.1	99.4	99.4

【培養条件】

細胞： ADSC（市販 P2 凍結細胞）
容器：細胞培養用６穴プレート（Corning社　品番： 3516）
培養：
4.75×10⁴ 個の細胞を細胞培養用6穴プレートに播種。培養3日目に細胞数をカウントし、継代およびフローサイトメトリー法により表面マーカーを解析した。

図6
(a) ADSC-2 ＋ 5% FBS で培養した P3 培養3日目の ADSC
(b) ADSC-2 ＋ 5% HS で培養した P3 培養3日目の ADSC
(c) HS P8 脂肪分化誘導後7日目の細胞（Oil Red O 染色）
(d) HS P8 骨分化誘導後21日目の細胞（Alizarin Red S 染色）

【培養条件】

細胞： ADSC（市販 P2 凍結細胞）を KBM ADSC-2 ＋ 5% FBS または KBM ADSC-2 ＋ 5% HS で 1～5 継代培養した細胞
容器：細胞培養用24穴プレート（FALCON社品番：353047）
培養：
- 脂肪
  6.25×10⁴ 個の細胞を細胞培養用24穴プレートに播種。培養用培地（D-MEM(H) ＋ 10% FBS）
  培養1日目に KBM Adipogenic-DM（仮）にて分化誘導を開始し2～3日ごとにメディウムチェンジを行い培養7日目に Oil Red O により染色。
- 骨
  6.25×10⁴ 個の細胞を細胞培養用24穴プレートに播種。培養用培地（D-MEM(H) ＋ 10% FBS）
  培養1日目に KBM Osteogenic-DM（仮）にて分化誘導を開始し2～3日ごとにメディウムチェンジを行い培養21日目に Alizarin Red S により染色。