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イオンチャネル発現細胞株の標識に特集：Alomone Labs社　蛍光標識毒素

メーカー名：Alomone Labs

標識毒素は、イオンチャネル研究において研究対象とするイオンチャネルを発現している細胞を直接標識できる理想的なツールです。
Alomone社では、ATTOやFITCで蛍光標識した数々の毒素を提供しています。Alomone社で実施したバイオアッセイでは、非標識毒素と比較して標識毒素の活性の低下は認められませんでした。Alomone社では、GABA(A)受容体やnAChRs（神経細胞型ニコチン性アセチルコリン受容体）に結合する毒素をはじめとした広範な商品を提供しています。さらに、inward rectifier K⁺チャネルブロッカーとvoltage-gated K⁺チャネルブロッカーもございます。

背景

膜タンパク質、特にイオンチャネルは、その複雑な構造のため、しばしば困難な研究課題となります。Alomone社では、この問題に取り組めるようペプチド毒素の特有かつ特徴的な性質を重視して、生細胞や組織のイオンチャネルを検出する新規ツールを開発しました。これらの標識毒素は極めて強力かつ信頼性が高いため、活性を維持したまま明瞭な視覚的検出を可能にします。

ATTO/ビオチン標識毒素の推奨用途

局在化と分布
クラスター形成と内部移行動態
生細胞画像化
単一細胞検出
結合動態

アプリケーション例

Tertiapinは21残基のペプチドからなる毒素で、元々は西洋ミツバチ（Apis mellifera）の毒液から分離されたものです。この毒素と、より安定した誘導体であるTertiapin-Qは、広範なinward rectifier K⁺（Kir）チャネル、特にROMK1（Kir1.1、IC₅₀ = 2 nM）とGIRK（Kir3ファミリー）を阻害します。
興味深いことに、これらの毒素はKir2ファミリーメンバーには効果を示しません。さらに、Tertiapinは、哺乳動物の心筋細胞においてアセチルコリン誘導型カリウム電流を阻害することが示されています。Alomone社のATTO標識Tertiapin-Q 製品は、純度が高く、合成された生理活性を有する標識ペプチド毒素です。濃度域50-200 nMにおいてアッセイ依存性の活性を示します。

図1 Tertiapin-Q-ATTO Fluor-488はXenopus oocytesにおいて異種性発現したKir3.2チャネルを阻害する
保持電位～80mVにおいて継続して電流を追跡し記録した。Kir3.2電流は高カリウムイオン含有溶液により活性化され下向きの反射を示した。活性化されている間に、50nMと100nMのTertiapin-Q-ATTO Fluor-488（#STT-170-AG）を２分間適用した（バーで示した）。

図2 Tertiapin-Q-ATTO Fluor-488はGIRK1/4-Cherryを形質転換したHEK293T細胞に結合する
形質転換した細胞を200nM Tertiapin-Q-ATTO-Fluor-488（#STT-170-AG）存在下で培養した。標識済み毒素は26秒後に膜表面に蓄積した。形質転換していない細胞では結合が見られなかった（データは未公開）。The pictures are a kind gift from the lab of Prof. Eithan Reuveny, Weizmann Institute, Israel to Alomone Labs.

商品ラインアップ

ターゲット	品名	品番	適用	タイプ	MW（Da）	活性	純度
GABA(A) receptor
α7, α1/β1/γ/δ nAChR, GABA(A) receptor	α-Bungarotoxin-ATTO Fluor-488	B-100-AG	LCI, BA	NP	~9140	1 nM - 3µM	>95%
	α-Bungarotoxin-ATTO Fluor-633	B-100-FR	LCI, BA	NP	~9140	1 nM - 3µM	>95%
	α-Bungarotoxin-FITC	B-100-F	LCI, BA	NP	~8406	1 nM - 3µM	>95%
GABA(A) receptor (allosteric modulator)	MmTx1 Toxin-ATTO Fluor-488	STM-550- AG	LCI, BA	SP	~7775	200-400 nM	>99%
Inward Rectifier K⁺ Channels
Kir1.1, Kir3.2 channel blocker	Tertiapin-Q-ATTO Fluor-488	STT-170- AG	LCI, BA	SP	3195.5	50-200 nM	>95%
Kir1.1, Kir3.2 channel blocker	Tertiapin-Q-ATTO Fluor-633	STT-170- FR	LCI, BA	SP	3195.6	50-200 nM	>95%
Nicotinic Acetylcholine Receptors
α7, α1/β1/γ/δ nAChR, GABA(A) receptor	α-Bungarotoxin-ATTO Fluor-488	B-100-AG	LCI, BA	NP	~9140	1 nM - 3µM	>95%
	α-Bungarotoxin-ATTO Fluor-633	B-100-FR	LCI, BA	NP	~9140	1 nM - 3µM	>95%
	α-Bungarotoxin-FITC	B-100-F	LCI, BA	NP	~8406	1 nM - 3µM	>95%
α3/β2 nAChR	α-Conotoxin ImI-ATTO Fluor-590	C-290-AR	LCI, BA	SP	1924	1?2 µM	>95%
Voltage-Gated K⁺ Channels
Kv1.3 channel blocker	Agitoxin-2-Cys-TAMRA	RTA-420-T	LCI, BA	RP	4673	50 pM -10 nM	>98%
Kv1.1, Kv1.3, Kv1.4, Kv1.6 channel blocker	Stichodactyla Toxin-ATTO Fluor-590	STS-400- AR	LCI, BA	SP	~ 4627	1-100 nM	>99%
Kv1.2 channel blocker	Tityustoxin-Kα-ATTO Fluor-594	STT-360- AR	LCI, BA	SP	~4900	0.5-50 nM	>98%

商品リスト

GABA（A）Receptors

GABA(A) 受容体はイオンチャネル型γ-アミノ酪酸A型受容体です。脳における迅速な抑制性シナプス伝達のほとんどは、γ-アミノ酪酸結合に応答してこれらのリガンド作動性イオンチャネルにより媒介されます。現在までに、哺乳動物の中枢神経系（CNS）では19種のGABA(A)受容体がクローニングされており、その配列相同性により7種のサブユニット（α、β、γ、δ、ε、φ、およびθ）に分類されています。これらは異なるサブユニットによって組み立てられた五量体構造からなり、それらのサブユニットは主にCl^-に対して透過性があり、神経興奮を減少させるように作用します。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
α-Bungarotoxin, ATTO 488	ALO	B-100-AG	0.1 MG	￥59,000
α-Bungarotoxin, ATTO 488	ALO	B-100-AG	5*0.1 MG	￥232,000
α-Bungarotoxin, ATTO 633	ALO	B-100-FR	0.1 MG	￥66,000
α-Bungarotoxin, ATTO 633	ALO	B-100-FR	5*0.1 MG	￥262,000
α-Bungarotoxin, Fluorescein Isothiocyanate	ALO	B-100-F	50 UG	￥29,000
α-Bungarotoxin, Fluorescein Isothiocyanate	ALO	B-100-F	5*50 UG	￥114,000
α-Bungarotoxin, Fluorescein Isothiocyanate	ALO	B-100-F	10*50 UG	￥159,000
MmTX1 Toxin, Snake, ATTO 488	ALO	STM-550-AG	5 UG	￥59,000
MmTX1 Toxin, Snake, ATTO 488	ALO	STM-550-AG	10 UG	￥84,000
MmTX1 Toxin, Snake, ATTO 488	ALO	STM-550-AG	2*10 UG	￥135,000
MmTX1 Toxin, Snake, ATTO 488	ALO	STM-550-AG	5*10 UG	￥269,000

Inward Rectifier K⁺ Channels

Inward Rectifier K⁺ （Kir）チャネルはその型や部位によって多様な生理機能を有します。現在までに、15種のKirサブユニット遺伝子が同定され、7種のサブファミリーに分類（Kir1からKir7）されています。これらのサブファミリーは、
1) 古典的なKirチャネル（Kir2.x）
2) G-タンパク質開口型Kirチャネル（Kir3.x）
3) ATP-感受性カリウムチャネル（Kir6.x）
4) カリウム輸送チャネル（Kir1.x、Kir4.x、Kir5.x、およびKir7.x）
といった4種の機能性集団に分類できます。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Tertiapin-Q, ATTO 488	ALO	STT-170-AG	5 UG	￥250,000
Tertiapin-Q, ATTO 488	ALO	STT-170-AG	5*5 UG	お問い合わせ
Tertiapin-Q, ATTO 633	ALO	STT-170-FR	5 UG	￥221,000
Tertiapin-Q, ATTO 633	ALO	STT-170-FR	5*5 UG	お問い合わせ

Nicotinic Acetylcholine Receptors（ニコチン性アセチルコリン受容体）

nAChRs（神経細胞型ニコチン性アセチルコリン受容体）は、様々なnAChRサブユニットの組み合わせにより構成された五量体の複合体であり、Cys192とCys193に類似した位置に２つのシステイン残基を持つαサブユニットと、脊椎動物の神経系で発現しているときにβサブユニットと定義されるnon_αサブユニット（「構造的」サブユニット）に分類されるαサブユニットに分類されます。CNSには9種のαサブユニット（α2-α10）と3種のβサブユニット（β2、β3、およびβ4）があります。ニコチン受容体はα（2-6）とβ（2-4）サブユニットの組み合わせにより構築されています。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
α-Bungarotoxin, ATTO 488	ALO	B-100-AG	0.1 MG	￥59,000
α-Bungarotoxin, ATTO 488	ALO	B-100-AG	5*0.1 MG	￥232,000
α-Bungarotoxin, ATTO 633	ALO	B-100-FR	0.1 MG	￥66,000
α-Bungarotoxin, ATTO 633	ALO	B-100-FR	5*0.1 MG	￥262,000
α-Bungarotoxin, Fluorescein Isothiocyanate	ALO	B-100-F	50 UG	￥29,000
α-Bungarotoxin, Fluorescein Isothiocyanate	ALO	B-100-F	5*50 UG	￥114,000
α-Bungarotoxin, Fluorescein Isothiocyanate	ALO	B-100-F	10*50 UG	￥159,000
α-Conotoxin ImI, ATTO 590	ALO	C-290-AR	10 UG	￥116,000
α-Conotoxin ImI, ATTO 590	ALO	C-290-AR	5*10 UG	￥337,000
α-Conotoxin ImI, ATTO 590	ALO	C-290-AR	10*10 UG	お問い合わせ

Voltage-Gated K⁺ Channels

カリウム選択性チャネルは、生体において最も広範に存在するイオン輸送分子の一部です。ヒトではカリウムチャネルをコードする遺伝子が70種以上存在します。KVチャネルは遅延整流（DR）とA型の２つの古典的な部類の何れかに分類されます。遅延整流（DR）は、ヤリイカ巨大軸索における遅延型の活性化に起因する電流依存性カリウムチャネルに対する最初の名称です。A-型チャネルは低電流で活性化され、急速に不活性化される（そのため、一過性である）カリウムチャネルです。天然電流に対するそれぞれのサブユニットの固有の電流への寄与を精査するために特異的なKV毒素がしばしば使用されます。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Agitoxin-2-Cys-TAMRA, Carboxytetramethylrhodamine	ALO	RTA-420-T	1 UG	￥168,000
Agitoxin-2-Cys-TAMRA, Carboxytetramethylrhodamine	ALO	RTA-420-T	5*1 UG	お問い合わせ
Stichodactyla Toxin, Actinia, ATTO 590	ALO	STS-400-AR	5 UG	￥159,000
Stichodactyla Toxin, Actinia, ATTO 590	ALO	STS-400-AR	5*5 UG	お問い合わせ
Stichodactyla Toxin, Actinia, ATTO 590	ALO	STS-400-AR	10*5 UG	お問い合わせ
Tityustoxin-Kα, ATTO 594	ALO	STT-360-AR	5 UG	￥221,000
Tityustoxin-Kα, ATTO 594	ALO	STT-360-AR	5*5 UG	お問い合わせ