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LDH-Blue™ 細胞毒性アッセイ

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メーカー名：InvivoGen

背景

LDH-Blue™ は、損傷を受けた細胞の培養上清中に含まれる乳酸脱水素酵素（Lactate Dehydrogenase, LDH）活性を測定するための高性能な比色アッセイです。
細胞死の信頼性の高い指標を提供し、従来の細胞生存率アッセイを強力に補完します。
簡便さと高感度を兼ね備えた設計により、LDH-Blue™はネクロトーシス、パイロトーシス、フェロトーシス、後期アポトーシス、免疫細胞による細胞傷害などの溶解性細胞死を正確に測定できます。

特長

簡便な操作
迅速な結果：30分以内に目視判定可能
高精度かつ高感度
溶解細胞数に比例した吸光度の直線性
フェノールレッドによる干渉なし
高いコストパフォーマンス

構成内容

Reagent Mix (凍結乾燥品)
Assay Buffer
Lysis Buffer
Stop Solution

プロトコル(概要)

図１．LDH-Blue™ 細胞毒性アッセイの概要

構成品を室温に戻す。(～20分)
反応溶液を調製する。
培養上清50uL、及びコントロールを別の96穴プレートに移す。
反応溶液を50uL加える。
室温で 30 分間インキュベート（遮光）。
停止溶液を50uL加える。
650nmの吸光度を測定する。

原理

仕様

サンプルタイプ

細胞培養上清

検出方法

比色法

用途

- 溶解性細胞死のモニタリング
- 化合物による細胞毒性評価
- 細胞依存性細胞傷害活性の評価
- 抗体依存性細胞傷害活性（ADCC）の評価
- 病原体による細胞死の評価
- 遺伝子スクリーニングまたは遺伝子編集による細胞毒性評価

データ例

溶解細胞数と放出されたLDH活性の直線的関係を表した図 — 図３．溶解細胞数と放出されたLDH活性の直線的関係
96ウェルプレートにおいて、濃度を段階的に増加させたTHP1-Null2細胞を、37°C、5% CO₂ 条件下で30分間培養した。
細胞に溶解バッファーを添加した場合（溶解細胞、青）または添加しなかった場合（未処理細胞、黒）で比較した。
上清中のLDH放出量をプロトコルに従い定量し、データは650 nmでのOD (平均値 ± SEM）として示した。

LDH-Blue™を用いたパイロトーシス細胞死の検出を表した図 — 図４．LDH-Blue™を用いたパイロトーシス細胞死の検出
THP1-Null2細胞を1 μg/mlのLPS-EK (Lipopolysaccharide from E. coli K12株) で3時間プライミング後、NLRP3インフラマソーム誘導因子であるNigericinを濃度を変えて添加した。
誘導6時間後に、上清中のLDH放出量をプロトコルに従い定量した。
結果は、陽性コントロールで測定した最大LDH放出量に対する百分率（平均値 ± SEM）として示した。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
LDH-Blue^TM Cytotoxicity Assay	ING	REP-LDH-1	200 TEST	￥26,000
LDH-Blue^TM Cytotoxicity Assay	ING	REP-LDH-5	1000 TEST [5 x 200 tests]	￥72,000
LDH-Blue^TM Cytotoxicity Assay	ING	REP-LDH-50	10000 TEST [50 x 200 tests]	お問い合わせ