記事ID ： 15527

ルーティーン実験にうれしい格安価格！エンハンサー／プロモーター分析、酵素スクリーニング、導入遺伝子発現解析に最適 Applied Biological Materials社ルシフェラーゼアッセイキット

メーカー名：Applied Biological Materials Inc.

Applied Biological Materials社のルシフェラーゼアッセイキットは、哺乳類細胞あるいは細菌で発現させたホタル（P. pyralis）由来ルシフェラーゼ遺伝子（luc）を、D-luciferin 基質を使用して、正確かつ効率的に測定します。

ロースループット、ハイスループットアッセイのいずれにもご使用いただけます。エンハンサー／プロモーター分析、酵素スクリーニング、導入遺伝子発現解析などの遺伝子発現分析に有用です。

構成内容

細胞を1X PBSで1回リンスします。その際、細胞モノレイヤーを崩さないように注意してください。
細胞モノレイヤーを被覆するのに十分な細胞溶解バッファーを添加します。
- 96ウェルプレートの場合： 20µL／ウェル
- 6ウェルプレートの場合： 150µL／ウェル
- 10cm 培養ディッシュの場合： 1mL
室温で20分間インキュベートします。
インキュベーション後直ちに細胞ライセートを回収し、サンプルを氷上に移します。ライセートサンプルにルシフェラーゼアッセイ試薬を等量加えます。ピペットで数回上下に混合します。
適切な器具を用いてルシフェラーゼアッセイ試薬を添加した後、30分以内にシグナルを測定します。

問題	考えられる要因	解決策
ルシフェラーゼシグナルを検出できない、低い	トランスフェクション効率が低い	トランスフェクション条件をモニターおよび最適化するために、可視化できるトランスフェクションコントロールを使用してください。トランスフェクション用の高品質なプラスミドDNAを調製してください。
	基質であるD-Luciferin の自動酸化	ルシフェラーゼアッセイ試薬を小分けにし、遮光で-20℃で保存してください。 3時間以上使用する場合、小分けしてある新しいルシフェラーゼアッセイ試薬を使用してください。
	ルシフェラーゼ発現が低い	細胞を溶解する際に使用する細胞溶解バッファーの量を少なくしてください。増殖条件を最適化してください。トランスフェクションプラスミドに別の（強力な）プロモーターを選択してください。