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膜流動性を測定するキットMarkerGene™ 膜流動性アッセイ(Membrane Fluidity Kit)

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本キットは親油性ピレン系プローブを用いて細胞膜、ミセル、およびベシクルの膜流動性(membrane fluidity)を解析するキットです。

スペクトル特性における変化を示す脂質アナログプローブを使用し、モノマー蛍光(Em max.372nm)とeximer 蛍光(EM 470nm)の比をとることで膜流動性の定量的観測ができます。フローサイトメトリーと顕微分析によって細胞機能の生体内モニタリングができます。

背景

細胞膜および細胞質の微小管、マイクロフィラメントの動的特性は、ミセルおよびベシクル内脂質の動的運動と同じく、多様な分野で重要です。例えば、多形核白血球および走化性の活性化、膜酵素系の活性化、微小管とマイクロフィラメントの流動とアッセンブリ、化学誘引物質レセプターの親和性の増強、膜流動性が関連する様々な病理学的症候群に関連します。 膜流動性は、蛍光プローブや磁気共鳴プローブの回転運動が側方拡散と異なる点で認識されてきました。短距離の側方拡散における膜流動性(Membrane fluidity)または膜粘度(membrane viscosity)は、脂質アナログプローブを用いて測定され、相互作用時にスペクトル特性が変化します。最良の系の一つとして、空間的な相互作用時にエキシマーを形成する親油性ピレン(lipophilic pyrene)を使用する方法があります。エキシマーを形成すると、ピレンプローブの発光スペクトルは、赤色(長波長)に劇的にシフトします。モノマー蛍光(EM max. 372 nm)とエキシマー蛍光(EM 470 nm)の比を測定することで、膜流動性の定量的モニタリングが可能です。この測定法は、カイネティックな情報を提供し、フローサイトメトリーおよび顕微鏡解析によって、細胞機能のin vivo モニタリングが可能です。

構成内容

  • Fluorescent Lipid Reagent (Pyrene decanoic aid:PDA) :1 x 2 mL(100 μM in ethanol)
  • Reference Standard :1 x 2 mL(2 mM pyrene in dimethylsulfoxide)
  • Perfusion Buffer :1 x 25 mL
  • Pluronic F127* :1 x 50 mg

*膜への親油性化合物の取り込みを促進する界面活性剤[8]

プロトコール概要

プロトコール概要

詳細

  1. 効率的な標識のために Pluronic F127 の標識溶液への添加を推奨します。
    使用:1% Pluronic F127 のストック溶液を滅菌水中で調製ください。ステップ2で終濃度0.08%の標識溶液を調製します。
  2. 10-20μMの蛍光脂質試薬と0.08% Pluronic F127 を含む標識試薬を、Perfusion Buffer(接着細胞用)または培地(浮遊細胞用)いずれかで調製します。
  3. 培養細胞または細胞懸濁液サンプルと標識溶液を混合し、暗所・25℃で20分間インキュベートします。反応系が均一になるように、細胞懸濁液を撹拌しながらインキュベートします。
  4. perfusion bufferまたは培地で2回洗浄し、取り込まれなかったpyrenedecanoic acidを除去します。
  5. 培地を添加します。
  6. すぐに測定しない場合、プラスチックラップまたはパラフィルムでプレートをカバーし、保管します(25℃、またはインキュベーター)。
  7. 蛍光を測定します。
    (400 and 450-470 nm using the appropriate laser emission or excitation filter for excitation at 360 nm.)
参考文献


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MarkerGene™ 膜流動性アッセイ

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
MarkerGeneTM Membrane Fluidity Kit詳細データ MGT M0271 1 KIT
¥47,000

製品使用文献

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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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