高純度プラスミドDNAの精製に MonoFas® プラスミド抽出キットⅢ

MonoFas® プラスミド抽出キットⅢは、プラスミドDNAがシリカモノリスに吸着する性質を利用し、E．Coli（大腸菌）の培養液から高純度なプラスミドDNAを抽出・精製することができる製品です。遠心または吸引による簡易操作で、サンプルから簡便に、最大45 ㎍までのプラスミドDNAを精製できます。精製したプラスミドDNAは、そのまま制限酵素処理、ライゲーション、シーケエンス、PCRやトランスフェクションなどに利用できます。

• MonoFas® DNA 抽出・精製キット 商品一覧

分子生物学において、高純度プラスミドDNAの需要が高まっており、クローニング技術の進歩により、サンプル数が大幅に増加し、ハイスループットかつ小スケールでのプラスミド調製が要求されています。前臨床試験、ドラッグデリバリーシステム、ワクチン製造などといった幅広い用途に応じて、高品質プラスミドDNAの選定と最適化も重要視されています。

本キットは、これまでのシリカメンブレンとは異なる、次世代の分離媒体「シリカモノリス」を利用し、短時間、高効率、高純度、しかも簡便に行なえる機能を持っています。また、高価なレジンや有毒な有機溶媒（フェノール、クロロホルムなど）を使用する必要もありません。

• プラスミドDNAへの損傷が少ない
• 後処理なしでトランスフェクション等の次のアプリケーションに適用可能
• 安定した回収率
• 10分間で迅速かつ簡単に精製可能

• スピンカラムセット
• 各種Buffer
• RNase A
• 簡易プロトコール

■高純度

図 1 大腸菌（DH5α株）1.5 mLから2.6 kbpプラスミドDNA抽出
シリカモノリスの均一なマクロ孔を通過する為、プラスミドDNAにニックなどが起こりにくい特徴があり、高純度に抽出が可能です。

■抽出プラスミド酵素処理

図 2 高コピープラスミドDNAの制限酵素処理
ARL1遺伝子を導入したプラスミドDNAを大腸菌（DH5α株）からMonoFas®を用いて抽出。レーン1〜3抽出後のプラスミドを、制限酵素 EcoRⅠ-HindⅢ にて消化し、目的遺伝子（ARL1;552 bp）を確認しました。

図 3 低コピープラスミドDNAの制限酵素処理
MonoFas®と他社製品で抽出したプラスミドDNAを用いて制限酵素で2時間処理した消化物です。

■高い再現性

図 4 大腸菌（JM109株）中の2.6 kbpプラスミド抽出
シリカモノリスの品質管理により、マクロ孔及びメソ孔のサイズが一定且つ均一であるため、再現性良く抽出が行えます。

■抽出プラスミド後処理なしにシーケンス解析

図 5
MonoFas®キットにより抽出したDNAサンプルは、抽出液中にナトリウムを含まないため、エタノール沈殿などの後処理をしなくてもシーケンスなどの実験に用いることが可能です。

図 6

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