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記事ID : 16028
研究用

次世代シーケンシング|16S rRNA メタゲノム解析ライブラリ調製キット(Illumina 社対応)
NEXTflex™ 16S V4 Amplicon-Seq Kit 2.0 for Illumina Library Prep

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NEXTflex™ 16S V4 Amplicon-Seq ライブラリー調製キット 2.0 は、微生物 16S リボソームRNA(rRNA)遺伝子の V4 超可変ドメインを含むマルチプレックスアンプリコンライブラリの調製にご使用いただけるキットです。これらのライブラリは、MiSeq Illumina® シーケンシングプラットフォームでのペアエンドシーケンシングに対応し、微生物群の個体数変動モニタリングに最適です。

16S V4 Amplicon-Seq ライブラリの調製は、主に次の2つのステップで行います。
V4 ドメインをターゲットにしたカスタマイズされたPCRプライマーを用いて行う1回目のPCR反応と、適切なフローセル結合ドメインとユニークな12塩基対のサンプルインデックスを組み込むための2回目のPCR反応です。精製ステップの回数が少ないことから、その後のシーケンシングにおいてアンプリコンの回収率を最大化することができます。
本キット「NEXTflex™ 16S V4 Amplicon-Seq Kit 2.0」では、旧バージョンで必要だった、カスタムシーケンスリードプライマーが不要になりました。

  • 迅速で簡単なライブラリ調製プロトコル
  • 少ないインプット量 - インプットに必要なサンプル量は 1 ng
  • 最大 384 ライブラリのマルチプレックス化が可能
  • カスタムシーケンスプライマー不要
  • 液体ハンドラーによる自動化に適したワークフロー
  • Illumina 社シーケンシングプラットフォームに対する機能検証済み

<特集ページはこちら>株式会社パーキンエルマージャパン NGS ライブラリ調製キット

図1 イヌの排泄物より単離したDNA 20 ng を用いて、本キットにより構築したライブラリから得られた 16S V4 リードを解析し、微生物群を属レベルで同定した。

図1 イヌの排泄物より単離したDNA 20 ng を用いて、本キットにより構築したライブラリから得られた 16S V4 リードを解析し、微生物群を属レベルで同定した。

特長

● 最適化されたプロトコル - PCRバイアスとオフターゲットリードの低減

本キットは、2回目のPCR反応の段階で、サンプル特異的なインデックス配列を組み込むことによって、アンプリコンシーケンシング時に発生するオフターゲットリード数を低減します。

● 少ないインプット量

本キットは、わずか 1 ng のゲノムDNAでライブラリ調製が可能です。

● 優れたコスト効率 - 384 種類のバーコードを利用可能

本キットは、最大 384 サンプルのマルチプレックス化が可能で、シーケンシングコストを大幅に低減できます。バーコードは 4、12、48、96 バーコードのセットで販売しており、各バーコードは反応2回分です。

構成内容

NEXTflex™ 16S V4 Amplicon-Seq Kit 2.0 for Illumina Library Prep

  • NEXTflex™ Amplicon PCR マスターミックス
  • NEXTflex™ 16S V4 PCR I プライマーミックス
  • NEXTflex™ PCR II Barcoded プライマーミックス 1 – 4
  • 再懸濁バッファー
  • ヌクレアーゼフリー水
 

<その他 必要な試薬・機械>

  • 1 ng - 50 ng 高品質ゲノムDNA (33 μL 以下のヌクレアーゼフリー水に溶解)
  • 96 ウェル PCR プレート(ノンスカート) (Phenix Research, Cat # MPS-499) または同等製品
  • PCR プレートシール (BioRad, Cat # MSB1001)
  • Agencourt AMPure XP 5 mL (Beckman Coulter Genomics, Cat # A63880)
  • 磁気スタンド -96 (Ambion, Cat # AM10027) または同等製品
  • サーマルサイクラー
  • 2, 10, 20, 200, 1000 μL ピペット/マルチチャンネルピペット
  • ヌクレアーゼフリー バリアーピペットチップ
  • ボルテックス
  • 80% エタノール(室温・用事調製)

プロトコール

図2 NEXTflex™ 16S V4 Amplicon-Seq キット 2.0 フローチャート

図2 NEXTflex™ 16S V4 Amplicon-Seq キット 2.0 フローチャート

NEXTflex™ 16S V4 Amplicon-Seq キット 2.0

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
NEXTflex(R) 16S V4 Amplicon-Seq Kit 2.0 (4 Barcodes) PEJ NOVA-4203-01 8 RXN
販売終了
NEXTflex(R) 16S V4 Amplicon-Seq Kit 2.0 (12 Barcodes) PEJ NOVA-4203-02 24 RXN
¥89,800
NEXTflex(R) 16S V4 Amplicon-Seq Kit 2.0 (48 Barcodes) PEJ NOVA-4203-03 96 RXN
¥323,800
NEXTflex(R) 16S V4 Amplicon-Seq Kit 2.0 (Barcodes 1- 96) PEJ NOVA-4203-04 192 RXN
お問い合わせ
NEXTflex(R) 16S V4 Amplicon-Seq Kit 2.0 (Barcodes 97 - 192) PEJ NOVA-4203-05 192 RXN
お問い合わせ
NEXTflex(R) 16S V4 Amplicon-Seq Kit 2.0 (Barcodes 193 -288) PEJ NOVA-4203-06 192 RXN
お問い合わせ
NEXTflex(R) 16S V4 Amplicon-Seq Kit 2.0 (Barcodes 289 - 384) PEJ NOVA-4203-07 192 RXN
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【関連商品】 16S & 18S メタゲノム解析ライブラリ調製キット

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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