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クロマチンの凝集を測定 Cell Meter™ 核アポトーシスアッセイキット（緑色蛍光・フローサイトメトリー用）

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メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

アポトーシスによるクロマチンの凝縮を測定することにより、細胞のアポトーシスをモニターできるキットです。

アポトーシス細胞の凝縮したクロマチンは、正常細胞と比較して、より多くの核染色色素に結合します。本キットは、DNAに結合すると強い蛍光を発する独自の非蛍光性色素を使用して、細胞内のDNA量を検出します。

使用目的

Nuclear Green™ DCS1 は、正常細胞では細胞透過性を示しませんが、アポトーシス細胞では、細胞膜の変化により容易に細胞内に浸透します。色素が細胞内に入ると、細胞内のDNAに結合して強い蛍光を発する複合体が形成され、細胞を非生存細胞として同定することが可能になります。Nuclear Green™ DCS1 の染色は、フローサイトメーター（Ex/Em = 490/520 nm、FL1 チャネル）や蛍光顕微鏡（FITC フィルターセット）を用いて測定します。本キットは、他のアポトーシス試薬［Cell Meter™ NIR ミトコンドリア膜電位検出キット（品番： 22802）など］と一緒に使用すると、細胞生存率とアポトーシスのマルチパラメータ解析を行うことができます。また、アポトーシスの活性化剤および阻害剤のスクリーニングにも最適です。

プロトコール概要

試験化合物で細胞（5 × 10⁵ ～ 1 × 10⁶ cells/mL）を処理する
5 μL の 200X Nuclear Green™ DCS1 を 1 mL の細胞溶液に添加する
室温で 30-60 分間インキュベートする
細胞をペレット化し、増殖培地 1 mL に再懸濁する
フローサイトメーターで蛍光強度を解析する

製品データ

カンプトテシンを添加した Jurkat細胞における、NuclearGreen™ DCS1 の蛍光強度の増加

図1　カンプトテシンを添加した Jurkat細胞における、NuclearGreen™ DCS1 の蛍光強度の増加
Jurkat細胞を、20μM カンプトテシン存在下（B）または非存在下（A）で、37℃、5％ CO₂ インキュベーターで一晩処理した。その後、NuclearGreen™ DCS1 色素を添加し、60分間染色した。染色時間の最後の15分間に、マルチカラー分析用に MitoLite™ NIR (品番： 22802) を添加した。Nuclear Green™ DCS1 および MitoLite™ NIR の蛍光強度を、FACSCalibur™ フローサイトメーター（FL1 チャネルと FL4 チャネル）を用いて測定した。