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研究用

ネイティブなタンパク質を45分以内に迅速分離核膜タンパク質抽出キット(細胞/組織用)

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培養細胞または動物組織由来の分離細胞から、ネイティブな核膜タンパク質とその結合タンパク質を45分以内に分離することができるキットです。

抽出物はネイティブタンパク質で、界面活性剤やEDTAを含みません。SDS-PAGE、イムノブロット、ELISA、IP、タンパク質移行アッセイ、酵素活性アッセイ等にご使用いただけます。

101 Bio社 高速・簡便なタンパク質抽出キット

使用目的

核膜は、非常に複雑な膜タンパク質構造を有しており、核と細胞質と接しているために分離・精製の困難なことがよく知られています。従来法では、核膜の分離・精製に非常に多くのサンプル量が必要であり、作業も煩雑で時間を要するものでした。

本製品は、培養細胞または組織由来の分離細胞から、ネイティブな核膜タンパク質を45分以内に簡便かつ迅速に単離することができます。

特長

  • 迅速 - 45分以内で抽出完了
  • 高収率・高濃度 - 10〜50 μg タンパク質/サンプル
  • 少量のサンプルに最適 - 細胞数 10〜20×106 個に対応

構成内容

  • バッファーA
  • バッファーB
  • フィルターカートリッジ
  • キャップ付きコレクションチューブ

プロトコール

  1. フィルターカートリッジを取り付けたコレクションチューブを氷上で予備冷却します。
  2. 10〜20x106 個の培養細胞または組織から分離した細胞を低速で遠心して回収します(500〜600xg, 5 分間)。
    動物組織を用いる場合の単一細胞懸濁液の調製には、Tissue (Tumor) Dissociation/Single Cell Isolation Kit を推奨します。
  3. 細胞ペレットを1 mLの冷却PBSで洗浄します。上清を完全に除去し、500μLのバッファーAで再懸濁します。氷上で10分間インキュベートします。ボルテックスで20秒間混合後、細胞懸濁液を直ちにフィルターカートリッジに移します。蓋をして14,000rpmで30秒間遠心します。
  4. フィルターを廃棄し、上清を完全に除去します。1 mLのPBSを添加後、10秒間のボルテックスによって細胞ペレット()を洗浄します。3,000 rpmで2分間遠心し、PBSを除去します。
  5. 300μLのバッファーBを添加し、10秒間のボルテックスで細胞ペレットを再懸濁します。氷上で5分間インキュベートします。再度10秒間ボルテックスを行い、さらに5分間インキュベートし、もう一度ボルテックスします。
  6. 8,000 rpm、4℃で5分間遠心します。上清を2.0mLチューブに移し、800 µLの冷却PBSを加えて10回転倒混和します。(本ステップで、核膜タンパク質が沈殿します。) 
  7. 14,000 rpm、4℃で15分間遠心します。上清を捨て、ペレットを保存します(核膜の分離完了)。
    タンパク質は、40〜60 μL の界面剤を含むバッファー*で溶解させることができます(*例:0.5% Triton X-100 or 0.2% SDS)。
    通常、10〜50 μg/サンプルのタンパク質を得ることができます。より多くのタンパク質が必要な場合、複数のサンプルから同時に抽出して、最終的にサンプルを1本に混合してください。

使用例

核膜タンパク質抽出キッで抽出したタンパク質

トラブルシューティング

問題点解決方法
抽出タンパク質の収量が低い サンプルの初期細胞数を増やしてください。
ステップ3のインキュベート時間を15分に延長してください。
抽出タンパク質の活性が低い ライセートを冷却し続けてください
プロテアーゼインヒビターを添加してださい。
ステップ6の8,00rpmでの遠心後、上清が粘着性となり、ピペットで扱いずらい サンプルの初期細胞数をを減らしてください。
核膜タンパク質画分に細胞質タンパク質のコンタミネーションが見られる 0.5 mLの洗浄バッファー*で核膜ペレットを洗浄してください。(*0.3 M NaCl in 100 mM Tris-HCl pH 9.0)

核膜タンパク質抽出キット(細胞/組織用)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Nuclear Envelope Protein Extraction Kit (Cells / tissues)詳細データ OBL P513L 50 RXN
販売終了

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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