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多発性硬化症などの神経変性疾患研究に！ヒト iPS 細胞由来オリゴデンドロサイト様細胞｜Bit Bio社

メーカー名：Bit Bio Limited

ioOligodendrocyte-like cells はヒト iPS 細胞由来オリゴデンドロサイト様細胞です。細胞には、ドキシサイクリンで転写因子の発現を誘導可能な「opti-ox」カセットが組み込まれており、細胞融解後、ドキシサイクリンを添加し培養することでオリゴデンドロサイト様細胞へ分化、成熟させます。

特長

検証済み
O4 陽性細胞は、はじめは典型的なオリゴデンドロサイト前駆細胞様の形態だが、成熟すると分岐が見られる。
短時間で使用可能
培養開始後1 日でO4 陽性細胞が得られ、8 日でO4 陽性、MBP 陽性細胞が得られる。
簡便
シンプルな単層培養プロトコール

仕様

核型
細胞由来	ヒト iPS 細胞
ドナー	白人男性 ( 皮膚線維芽細胞)
核型	46, XY* *High-resolution Optical Genome Mapping (OGM) has identified a ~35mb gain of the short arm of chromosome 12
包装	Small: 1 x 10⁶ cells
品質確認方法	・免疫染色・ RT-PCR
品質確認方法
推奨播種密度	27,000 cells/cm²
使用可能なプレート	6、12、24、96 well plate

ioOligodendrocyte-like cellsは凍結保存された状態で提供され、培養推奨培地で培養すると急速に成熟するようにプログラムされています。これらの細胞の分化プロトコルは2段階のプロセスで構成されており、1日間の安定化期間を経た後、10日目までの成熟期間に入ります。

製品データ

細胞融解から数日以内で試験に使用可能

ioOligodendrocyte-like cellsは細胞融解後に急速かつ均一にオリゴデンドロサイト様の形態に変化します。

細胞融解後8~10日以内に実験データを得ることが可能

細胞の形態

ioOligodendrocyte-like cellsは急速に成熟し、細胞融解後8日目には細胞がオリゴデンドロサイト様の形態を示す。

動画：ioOligodendrocyte-like cells（分化・成熟の様子）

マーカータンパク質の発現

ioOligodendrocyte-like cellsの細胞融解後1日目時点（上段）では、細胞はオリゴデンドロサイト特異的マーカーO4（緑）陽性を示した。8日目（中段）と10日目（下段）時点ではO4（緑）だけでなく、ミエリン塩基性タンパク質（MBP）（赤）も陽性を示し、オリゴデンドロサイト様細胞は複雑性が増していた。

オリゴデンドログリアマーカーの遺伝子発現

分化誘導により、多能性マーカーであるOCT4 の発現は抑えられた。一方で、オリゴデンドログリアマーカーであるPDGFRA、PLP1、MBP、CNP、MAG、MYRF の発現が確認された。遺伝子発現量はRT-PCRにより解析し、ハウスキーピング遺伝子であるHMBS で補正した (n=2 technical replicates)。

シングルセルRNAシーケンシング解析により、ioOligodendrocyte-like cellsを解析した結果、培養開始1日目時点の細胞集団はPDGFRAやPTPRZ1などのオリゴデンドロサイト前駆遺伝子の発現し、オリゴデンドログリア細胞特有の発現プロファイルを示した。8日目時点では、MBP、PLP1、CNP、MYRF、MALなどの成熟オリゴデンドロサイト関連遺伝子の発現が増加し、細胞集団がより成熟していた。

ロット間の高い一貫性

ioOligodendrocyte-like cellsの異なる3ロットの製品について、細胞融解後1日目と8日目にバルクRNAシーケンシング解析を実施した。全ロットが非常に密集しており、各時点において高い一貫性が示されている。

各種ioCellsとの共培養にも対応

複雑な多細胞モデルは、アルツハイマー病や多発性硬化症などの神経変性疾患の疾患メカニズムにおけるグリア細胞の役割についての洞察を提供できる可能性があります。

ioGlutamatergic Neuronsとの共培養

ioGlutamatergic NeuronsとioOligodendrocyte-like cellsを共培養し、免疫染色した結果1

ioGlutamatergic NeuronsとioOligodendrocyte-like cellsを1 µMまたは100 µM db-cAMPを含む培地で共培養し、14日目および21日目にMBP（緑）およびTUBB3（赤）、核をDAPI（青）で対比染色した。

ioGlutamatergic Neuronsとの共培養

ioGlutamatergic NeuronsとioOligodendrocyte-like cellsを共培養し、免疫染色した結果2

オリゴデンドロサイトマーカーであるMBP（緑）を発現するioGlutamatergic Neuronsと汎神経マーカーであるTUBB3（赤）を発現するioOligodendrocyte-like cellsを共培養すると、オリゴデンドロサイトマーカーであるMBP（緑）の発現が増強し（A）、MBP陽性細胞数も増加した（B）。
データ提供：Bsibsi, M. et al., 2024、Charles River Laboratories

ioGlutamatergic Neurons・ioMicroglia・ヒトiPSC由来アストロサイトとの共培養

培養14日目における、MBP（緑）を発現するioOligodendrocyte-like cells、NF-200（左の画像、赤）およびTUBB3（右の画像、赤）を発現するioGlutamatergic Neurons、IBA1（右の画像、黄）を発現するioMicroglia、S100B（左の画像、黄）を発現するヒトiPSC由来アストロサイト、およびDAPI対比染色（青）を含む多細胞培養の免疫蛍光染色像。