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記事ID : 33400
研究用

遊離硫化水素ガス(H2S)の定量にOxiSelect™ 遊離硫化水素ガスアッセイキット

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遊離硫化水素を比色定量するキットです。遊離硫化水素が、銀イオン(Ag+)と反応して、茶色の硫化銀(Ag2S)を生じる反応を利用します。

背景

硫化水素とは

硫化水素 (H2S) は、腐乱臭を放つ無色の気体で、高濃度では腐食性・引火性があり有毒です。硫化水素は、嫌気性消化プロセスと呼ばれる嫌気性条件下 (沼地や下水など) で微生物によって 有機物が分解される際に生じます。また、自然界にも存在し、火山から発生したり、湧水に含まれていたりします。ヒトの身体でも、一酸化炭素や一酸化窒素のようなガス状のメッセンジャーとして機能するため、微量のH2S が生成されています。硫化水素はシスタチオニンγリアーゼにより生成され、脳血管拡張薬として作用します。その他、ATP感受性カリウムチャネルを介して小動脈を拡張させたり、血管平滑筋細胞のアポトーシスを刺激し、増殖による血管リモデリングを抑制します。結果的に、硫化水素は神経保護や心臓保護作用、そして神経細胞へのシスチン・システイン輸送を促進し、グルタチオンレベルを上昇させることで酸化ストレスの低減作用があります。

特長

  • 適用サンプル:酵素、細胞、組織を含む溶液
  • 100アッセイ分
  • ポジティブコントロールとしてNa2S・9H2O (硫化ナトリウム九水和物)付属

構成内容

  • Na2S・9H2O (硫化ナトリウム九水和物)
  • ポリマーマトリックス
  • 20× 銀プローブ溶液

アッセイ原理

本製品は、遊離硫化水素を定量するキットです。まず、96ウェルマイクロプレートに硫化水素を含む酵素や細胞、組織などの液体サンプルを注入して、プレートにふたをします。プレートのふたの裏には、硝酸銀を含む薄いポリマーがコートされています。サンプルから遊離した硫化水素ガスが、銀イオン(Ag +)と反応して、ふたの裏に硫化銀(Ag 2S)の茶色いスポットができます(図1)。このスポットについて、マイクロプレート分光光度計を用いて405 nmにおける吸光度を測定します(図2)。

遊離硫化水素ガスのアッセイ原理
図1. 遊離硫化水素ガスのアッセイ原理

遊離硫化水素ガスのアッセイプロトコールの略図
図2. 遊離硫化水素ガスのアッセイプロトコールの略図

使用例

硫化水素ドナー(硫化ナトリウム)から発生している硫化水素ガスの検出
図3. 硫化水素ドナー(硫化ナトリウム)から発生している硫化水素ガスの検出
左:数字は加えた硫化ナトリウム濃度(µM)を示している。
右:硫化ナトリウム溶液を加えて室温で1時間インキュベートしたプレートのふた。
発生した硫化水素ガスが混ざらないようにウェルの間隔を空けている。

生成した硫化銀スポットの吸光度
図4. 生成した硫化銀スポットの吸光度

シスタチオニン-β-合成酵素(CBS)リコンビナントからの硫化水素の発生
図5. シスタチオニン-β-合成酵素(CBS)リコンビナントからの硫化水素の発生
ポリマーでコートしたふたを、40 µgのCBS非存在下(-CBS)とCBS存在下(+CBS)で1時間インキュベートし、アッセイプロトコールに従って分光光度計で吸光度を測定した。

参考文献


  • Leffler WL, Parfenova H, Jagger JH, and Wang R (2006). Carbon monoxide and hydrogen sulfide: gaseous messengers in cerebrovascular circulation. J. Appl. Physiol. 100, 1065-1076.

  • Greabu M, Totan A, Miricescu D, Radulescu R, Virlan J, and Calenic B. (2016). Hydrogen Sulfide, Oxidative Stress and Periodontal Diseases: A Concise Reivew. Antioxid. (Basel). 5:3-21.

  • Predmore BL, Lefer DJ, and Gojon G. (2012). Hydrogen sulfide in biochemistry and medicine. Antioxid. Redox Signal. 20: 2118-2120.

  • Kimura H. (2015). Hydrogen sulfide and polysulfides as signaling molecules. Proc. Jpn. Acad. Ser. B Phys. Biol. Sci.91: 131-159.

  • Cheng Y, Ndisang JF, Tang G, Cao K and Wang R. (2004) Sensitive relaxant response of rat mesenteric atery beds to hydrogen sulfide. Am. J. Physiol. 287: H2316-H2323.

  • Yang G, Cao K, and Wang R (2004). Cystathionine gamma lyase overexpression inhibits cell proliferation via a H2S-dependent modulation of ERK ½ phosphorylation and p21Cip/WAK-1. J. Biol. Chem. 279:49199-49205.

  • Kimura H, Shibuya N, and Kimura Y.(2012) Hydrogen sulfide is a signaling molecule and a cytoprotectant. Antioxid.Redox Signal.17:45-57.

OxiSelect™ 遊離硫化水素アッセイキット 

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
OxiSelectTM Free Hydrogen Sulfide Gas Assay Kit詳細データ CBL XAN-5084 100 ASSAY
¥65,000
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