細胞または組織ライセート中のトータルPAD活性を定量的に測定 PAD 検出キット

PAD（Peptidyl Arginine Deiminase）検出キットは、細胞または組織ライセート中のトータルPAD活性を定量的に測定するELISAキットです。
キットには、ポジティブコントロールとして、PADカクテルが含まれております（^※1）。
※1 完全長PAD（1,2,3,4,6,）リコンビナントタンパク質のカクテルです。各リコンビナントタンパク質は、Sf9-バキュロウイルス発現系で作製され、N末端にGSTタグが付加されています。

Protein Arginine Deiminases：PADとは？

タンパク質アルギニンデイミナーゼ（Protein Arginine Deiminases：PAD）ファミリーは、標的タンパク質のアルギニンからシトルリンへの変換（シトルリン化）を触媒します。哺乳類のPADには、約50%の配列相同性を共有する5つのアイソフォーム（PAD1-4, PAD6）があります。PAD1-4は活性型で存在していますが、PAD6は重要な変異のために不活性型で存在することが示されています。In vitroでは、これまでにPAD6の基質タンパク質は見つかっていませんが、各PAD酵素は独自の細胞内局在、組織分布および基質特異性を有しています。

タンパク質のシトルリン化は、タンパク質の翻訳後修飾の一種で、アルギニン残基が脱イミノ化されてシトルリンに変換されます。アルギニン側鎖が脱イミノ化されると、正電荷が失われ、修飾されたタンパク質の局所的な疎水性が増加します。その結果、タンパク質のアンフォールディング、タンパク質−タンパク質またはタンパク質−DNA相互作用、および異常な免疫応答を誘発する新規抗原性エピトープが生じます。

多くのシトルリン化タンパク質は、分化、小器官維持、胚発生、自己免疫および遺伝子調節のような、生理学的プロセスにおいて重要な役割を果たします。そのためシトルリン化の異常は、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、エリテマトーデス、がん等を含む多くの疾患の病因に関連すると考えられており、シトルリン化タンパク質が、これらの疾患の強力なバイオマーカーとして注目されています。したがって、複雑な生体試料中のタンパク質のシトルリン化活性を正確にモニターするアッセイが極めて重要であることが示唆されています。

• Detection Antibody, 500X 25 µl/1 vial
• NeutrAvidin Coated Plate 1 plate
• TMB Substrate 6 ml/1 vial
• PAD Buffer 8 ml/1 vial
• Stop Solution 3 ml/1 vial
• Trypsin Digestion Buffer 15 ml/1 vial
• Wash Buffer, 20X 15 ml/2 vials
• PAD Cocktail, Active 5 µg/1 vial
• DTT Solution 10 µl/1 vial
• Trypsin, Active 200 µg/1 vial
• PAD Substrate 0.5 mg/1 vial

図1 ヒトリコンビナントPADを用いた、検出キット（品番：P312-863）の感度および特異性

図2 PAD検出キットのワークフロー

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