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AAVのタイター測定に QuickTiter™ AAV Titer ELISA キット

カテゴリから探す > 分子生物 > 遺伝子導入 > ウイルス系トランスフェクション試薬 > アデノ随伴ウイルス（AAV）

メーカー名：Cell Biolabs, Inc.

ウイルスベクターによる遺伝子デリバリーにおいて特に課題となるのは、ウイルスタイターの正確な測定です。これまでAAV粒子はDNAドットブロットや類似したアプローチによりゲノムコピー数（GC）を確認することで定量されてきました。しかし、これらの手法は時間を要する上、アッセイ間のばらつきが多大な影響を及ぼします。高純度のウイルスサンプルの場合、260nmにおける光学的吸収を用いてトータルウイルス粒子数の算出が行われます。しかし未精製のウイルス上清の場合、未精製の上清に含まれる他の成分も260nmで吸収されるためこの方法を使うことができません。
本キットは、精製済みのAAVウイルスサンプルのタイター測定を迅速に行うELISAキットです。

背景

ウイルスの遺伝子デリバリーシステムには、レトロウイルス（RV）、アデノウイルス（AdV）、アデノ随伴ウイルス（AAV）、レンチウイルス（LV）、および単純ヘルペスウイルス（HSV）から開発されたベクターなどがあります。AAVは、最も小さい1本鎖かつ無エンベロープDNAウイルス群であるパルボウイルス科ファミリーに属します。現在、11種のAAVセロタイプが報告されています。

リコンビナントAAV-2は遺伝子デリバリーに利用される最も一般的なセロタイプであり、ヘルパーウイルスやCell Biolabs社のAAV Helper-Free Systemを利用して高タイターで産生することができます。AAV-2は分裂細胞と非分裂細胞の両方に感染することができ、ヒト宿主細胞内で維持することもできるため、長期の遺伝子導入が可能です。AAV-2は本来は欠陥ウイルスであり、増殖性感染するためにはトランス配置にいくつかの因子を供給する必要があるため、安全に使用できるウイルスベクターであると考えられています。近年、DNAファミリーシャフリングを用いて8種のAAVセロタイプからハイブリッドカプシドを作製し、AAV-DJという新規ベクターが開発されました。このベクターはin vitroにおいて多様な細胞や組織にわたり著しく高い感染効率を示します。

リコンビナントAAV-2とAAV-DJベクターは、塩化セシウム（CsCl）勾配超遠心法、イオジキサノール不連続勾配超遠心法、またはCell Biolabs社のViraBind™ AAV Purification Kitにより精製できます。

特長

検出感度　6.25ｘ10⁸ viral particle(VP/mL)

構成内容

抗-AAV抗体コート済プレート（ストリップタイプ）
抗-AAV抗体（1000x）
HRP標識二次抗体
アッセイ希釈液
可溶化バッファー（10x）
塩バッファ（25x）
洗浄バッファー（10x）
基質溶液
停止液
不活化済みAAV スタンダード

参考文献

Rabinowitz, J, and Samulski, R. J. (1998) Curr. Opin. Biotechnol., 9, 470-475.
Summerford, C., and Samulski, R. J. (1999) Nat. Med., 5, 587-588.
Clark, K., Liu, X., McGrath, J., and Johnson, P. (1999) Hum. Gene Ther., 10, 1031-1039.
Sonntag, F., Schmidt, K., and Kleinschmidt, J.A. (2010) Proc Natl Acad Sci U S A., 107, 10220-5.