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カルプロテクチンの構成物質である S100A9 を測定ラット S100A9 アッセイキット

メーカー名：ヤマサ醤油株式会社

炎症性腸疾患のバイオマーカーとして知られるカルプロテクチンの構成物質である S100A9（ラット）を ELISA 法により測定できるキットです。

背景

カルプロテクチンは S100A8 と S100A9 の2つの蛋白質の複合体であり、炎症性腸疾患のバイオマーカーとして知られています。
ヤマサ醤油では、ラットカルプロテクチン構成蛋白質である S100A9 に対するモノクローナル抗体を用いて、ラット S100A9 測定用 ELISA を開発しました。本 ELISA を用いてデキストラン硫酸ナトリウム（DSS）誘発潰瘍性大腸炎（UC）モデルラットの糞便中　S100A9　を測定した結果、炎症早期から S100A9 濃度が上昇し、UC モデルの良い指標となることが示唆されました¹⁾。

特長

96穴マイクロプレートによるELISA法です。
ラット S100A9 を 3.75～240 ng/mL の範囲で測定可能です。
測定に必要な反応時間は一次反応2時間、二次反応1時間、発色反応20分です。
ラット血清および糞便中^※1 の S100A9 測定が可能です。^※2

※1：糞便中 S100A9 の測定には、抽出操作が必要です。詳しくは「測定上の注意」をご参照下さい。
※2：試料は希釈して測定して下さい。詳しくは「測定上の注意」をご参照下さい。

構成内容

構成品名	容量	数量
抗体固相プレート	96穴マイクロプレート	1枚
S100A9標準液1 (3.75 ng/mL)	0.5 mL	1バイアル
S100A9標準液2 (15 ng/mL)	0.5 mL	1バイアル
S100A9標準液3 (60 ng/mL)	0.5 mL	1バイアル
S100A9標準液4 (240 ng/mL)	0.5 mL	1バイアル
希釈液（3倍濃縮液）	25 mL	1バイアル
洗浄原液(5倍濃縮液)	50 mL	1バイアル
酵素標識抗体	0.15 mL	1バイアル
発色液A	11 mL	1バイアル
発色液B	0.5 mL	1バイアル
反応停止液	11 mL	1バイアル

測定原理

2種類のマウス由来モノクローナル抗ラット S100A9 抗体を用いたサンドイッチ ELSIA です。

測定方法

測定方法概要

抗体固相プレートに標準液または検体を 100 μL ずつ分注

↓　室温、2時間静置

反応液を除去後、調製済み洗浄液 300 μL を各ウェルに分注

↓　同操作を3回繰り返す

反応液を除去後、調製済み標識抗体 100 μL を各ウェルに分注

↓　室温、1時間静置

反応液を除去後、洗浄液 300 μL を各ウェルに分注

↓　同操作を3回繰り返す

調製済み発色液 100 μL を各ウェルに分注

↓　室温、20分静置

反応停止液 100 μL を各ウェルに分注

↓

各ウェルの 450nm での吸光度を測定する

測定上の注意

検討に用いたラット糞便からの抽出方法例は下記の通りです。ご参考の上、目的にあった抽出方法をご検討下さい。
- 抽出用希釈液の調製
  キット添付の希釈液を精製水にて3倍に希釈した溶液に最終濃度 0.5% (w/v) となるように Triton X-100 を加え、抽出用希釈液として使用します。
- 使用器具
  ペッスル、糞便回収用チューブ（ペッスルを差し込める口径の物）など
- 抽出方法
  1. 予め各糞便回収用チューブの重量を測定しておきます。
  2. 200 mg 前後の便を糞便回収用チューブに回収します。
  3. 回収後重量を測定し、チューブの重量を差し引き、便の重量を算出します。
  4. 糞便回収用チューブに抽出用希釈液を 500 μL 加えて、15分静置します。
  5. ペッスルを使用し、便を粉砕して良く攪拌します。
  6. 抽出用希釈液 500 μL でペッスルを洗いながら、全ての残物を回収します。
  7. 4℃、12,000×g で　5分間遠心し、上清を別チューブに回収します。
  8. 上清を抽出用希釈液にて10倍以上に希釈します。
  9. 標準操作法により上清中の S100A9 濃度を求め、糞便 1mg 当たりの S100A9 を算出して下さい。
試料は添付の希釈液にて希釈してから測定して下さい。ラット血清および糞便抽出液共に10倍希釈が目安です。測定範囲以上の濃度を示す試料ついては、適宜希釈して下さい。