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アッセイキット、抗体を販売ロックランド社 NF-κB シグナリング関連商品

メーカー名：Rockland Immunochemicals, Inc.

Rockland社では、NF-κB転写因子アッセイキット（ELISA）、抗体を販売しております。

背景

NF-κBについて

NF-κBは、ストレスやサイトカイン、紫外線等の刺激により活性化されます。

NF-κBは免疫反応において中心的役割を果たす転写因子の1つであり、急性及び慢性炎症反応や細胞増殖、アポトーシス等の数多くの生理現象に関与しています。NF-κB活性制御の不良はクローン病や関節リウマチ等の炎症性疾患をはじめ、癌や敗血症性ショック等の原因となります。特に悪性腫瘍では多くの場合NF-κBの恒常的活性化が認められます。さらにNF-κBは、サイトメガロウイルス（CMV）やヒト免疫不全ウイルス（HIV）の増殖にも関与していると示唆されています。

図1: NF-κB シグナリングパスウェイ
The NF-κB p65/p50 ヘテロダイマーは、活性化するまで細胞質に局在する。刺激によって、p65サブユニットのリン酸化させるIκBの調節タンパク質が分解され、NF-κBダイマーが核内に移動する。核内のリン酸化されたp65は、さまざまな免疫調節遺伝子の転写を活性化する。

転写因子アッセイ

ロックランド社のNF-κB転写因子アッセイキットは、核抽出物や細胞ライセート中のNF-κB（p50）を検出します。

【構成内容】

転写因子結合アッセイバッファー（4×）
転写因子溶液A
転写因子抗体結合バッファー（10×）
プレートカバー
転写因子NF-κB（p50）一次抗体
転写因子現像液
洗浄バッファー（400×）
転写因子停止溶液
転写因子NF-κB（p50）ポジティブコントロール
転写因子NF-κB特異的競合dsDNA
Tween 20
HRP標識ヤギ由来抗ウサギ二次抗体
転写因子NF-κBプレート（96well）

図1　本キットによるHeLa細胞（TNF-αで刺激済み）の核フラクション中NF-κB（p50）の測定
図2　品番KAA064によるHeLa細胞（TNF-αで刺激済み）の核フラクション中NF-κB（p50）の測定

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
NFkB (P50) ELISA Kit	RKL	KAA064	1 KIT	￥316,000
NF-kB (P65) ELISA Kit	RKL	KAA065	1 KIT	￥316,000

抗体

図3： Anti NF-κB p65 (RelA) (品番：200-301-065)を用いてp65をウエスタンブロットにより検出した。セルライセートはRIPA lysis バッファーにより調製し、4-12％ゲル上で泳動した。ブロットは、Anti p65（一次抗体・希釈 1：1000）およびHRP標識Anti mouse antibody（希釈 1：10,000）を用いて行った。 NF-κBのRelA/p65サブユニットに対応する65kDaに特異的なバンドが検出できた。

図4: p65 サブユニットの免疫組織染色
NF-κB (RelA) （品番：200-301-065）を用いて免疫組織染色を行った。この抗体は、ホルマリン固定パラフィン包埋組織切片（ヒト胸部上皮組織や小腸、腎臓、膵臓、前立腺、皮膚、胎盤、子宮を初め、神経や脾臓・胸腺・甲状腺などのリンパ系組織）でシグナルが見られる。2.5ug/mlの濃度で、きれいなシグナルが得られる。
赤いシグナルは、ヘマトキシリンで核を対比染色したヒト結腸癌組織の特異的なシグナルを示す。

図5： anti NF-κB p65 (Rel A) antibodyを用いて免疫蛍光染色でp65細胞を検出。

HeLa細胞（18 mm2）のガラスカバーにsub-confluentになるように培養した。細胞は、固定前に刺激無しまたは50ng/mlのTNFαで刺激した。

細胞は、メタノールで固定後、10％の正常ヤギ血清および0.2％のTritonでブロッキングした。一次抗体（品番：200-301-065）を使用し（希釈 1:1000）、ブロッキングバッファーで洗浄後、DyLight 488標識ヤギ抗マウス抗体（品番　610-141-121、希釈 1：5000）で処理した。

Panel A：刺激なし：p65の細胞質の染色（緑色）
Panel B：p65の強いシグナルが核で見られた（緑色）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Anti NFKB cRel, Human (Rabbit) Unlabeled	RKL	100-4166	100 UL	￥133,000
Anti NFKB p50 (NFKB1), Human (Rabbit) Unlabeled	RKL	100-4164	100 UL	￥133,000
Anti NFKB p65 (Rel A), Human (Mouse) Unlabeled, 27F9.G4	RKL	200-301-065	100 UG	￥136,000
Anti NFKB p65 (Rel A), Human (Rabbit) Unlabeled	RKL	100-4165	100 UL	￥133,000
Anti IKBα, Human (Rabbit) Unlabeled	RKL	100-4167C	100 UL	￥133,000
Anti IKKε, phospho Thr501, Human (Rabbit) Unlabeled	RKL	600-401-267	100 UG	￥133,000
Anti NFKB p65 (Rel A), phospho Ser276, Human (Rabbit) Unlabeled	RKL	100-401-264	100 UL	￥133,000
Anti TNF-α, Human (Rabbit) Unlabeled	RKL	209-401-306	1 MG	￥344,000