記事ID ： 46598

RLR（RIG-I様受容体）の伝達経路を容易にモニタリング可能 RLR（RIG-I様受容体）レポーター細胞株

メーカー名：InvivoGen

RLRレポーター細胞株のシグナル伝達経路例を示した図 — 図１：RLRレポーター細胞株のシグナル伝達経路例

InvivoGen は、RLR（RIG-I様受容体：主にRIG-I、MDA5）を介したシグナル伝達経路を容易にモニタリングするための、さまざまなヒトおよびマウス細胞株を提供しています。
RIG-IまたはMDA5が活性化されると、最終的にインターフェロン調節因子（IRF3およびIRF7）依存性のI型インターフェロン産生とNF-κB依存性の炎症性サイトカイン産生を引き起こします。
本レポーター細胞は、これら転写因子により誘導されるレポーター遺伝子を発現しており、活性化に応答して SEAP（分泌型アルカリホスファターゼ）および/または Lucia（分泌型ルシフェラーゼ）を発現するように設計されています。
両方のレポータータンパク質は培養上清に分泌されるため、検出試薬を用いてシグナル経路の活性化を容易に検出できます。

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背景

RLRは、細胞質RNAを感知することでウイルスに対する効果的な免疫応答に不可欠で、下記3つの細胞質RNAヘリカーゼが知られています。

RIG-I（レチノイン酸誘導タンパク質I）とMDA5（メラノーマ分化関連遺伝子5）は、RNAウイルスの複製中間体である二本鎖RNA（dsRNA）を感知します。
LGP2（別名：DHX58）はRNA結合ドメインを有し、RIG-IおよびMDA5の負のフィードバック制御因子として機能します。

通常、活性化されたRIG-IまたはMDA5は、アダプタータンパク質MAVS（ミトコンドリア抗ウイルスシグナル伝達タンパク質、別名IPS1またはVISA）によってリクルートされ、インターフェロン調節因子（IRF3およびIRF7）依存性のI型インターフェロン産生とNF-κB依存性の炎症性サイトカイン産生を引き起こします。

RLRレポーター細胞株のシグナル伝達経路図 — 図2：RLRレポーター細胞株のシグナル伝達経路

特長

代表的なPRRリガンドによって機能検証済み
生存率、安定性、マイコプラズマ陰性について徹底的に試験済み
SEAPレポーター活性およびLuciaルシフェラーゼで容易に評価可能

商品データ例

図２：HEK-Dual™ RNA-hMDA5細胞のPRRリガンドに対するIRFの用量依存的反応
HEK-Dual™ RNA-hMDA5細胞に対して、LyoVec™(LV)と複合したPoly(I:C) HMWまたはLMWの濃度を段階的に増加させ、24時間刺激した。IRF反応は、QUANTI-Luc™ 4 Lucia/Gaussiaを用いて上清中のLuciaルシフェラーゼ活性を測定することで評価した。データは、非誘導細胞に対する応答倍率（平均値±SEM）で示されている。

図３：HEK-Dual™ RNA由来細胞の機能検証（IRF応答）
HEK-Dual™ RNA-Null細胞およびHEK-Dual™ RNA-hMDA5細胞を、以下のサイトカインおよびPRRアゴニストで24時間刺激した：ヒト(h)IFN-β（IRF陽性コントロール、30 ng/ml）、Poly(I:C) HMWまたはLMW（TLR3リガンド、10 µg/ml）、LyoVec™(LV)と複合したPoly(I:C) HMWまたはLMW、または3p-hpRNA/LV（RLRリガンド、1 µg/ml）。24時間インキュベーション後、QUANTI-Luc™ 4 Lucia/Gaussiaを用いて上清中のLuciaルシフェラーゼ活性を測定することでIRF応答を評価した。データは、非誘導細胞に対する応答倍率（平均±SEM）で示されている。

商品選択ガイド

HEK293（ヒト胎児腎臓由来）

細胞品名（品番）	改変RLR遺伝子	パスウェイ	レポーター遺伝子名	コントロールリガンド例（品番）
HEK-Dual™ RNA-Null （HKD-RNA-NULL）	TLR3、RIG-I, MDA5（Null）^*1	NF-κB, IRF	SEAP, Lucia luciferase	-
HEK-Dual™ RNA-hRIG-I （HKD-RNA-RIGI）	^*1のRIG-I （再導入）	NF-κB, IRF	SEAP, Lucia luciferase	5’ppp-dsRNA（TLRL-3PRNA） 3p-hpRNA（TLRL-HPRNA）
HEK-Dual™ RNA-hMDA5 （HKD-RNA-MDA5）	^*1のMDA5 （再導入）	NF-κB, IRF	SEAP, Lucia luciferase	Poly(I:C) (HMW) / LyoVec™ （TLRL-PICLV） Poly(I:C) (LMW) / LyoVec™ （TLRL-PICWLV）
HEK-Lucia™ RIG-I （HKL-HRIGI）	RIG-I（導入）	IRF	Lucia luciferase	5’ppp-dsRNA（TLRL-3PRNA） 3p-hpRNA（TLRL-HPRNA）

※RNAセンサー細胞株として、^*1のTLR3を再導入した、HEK-Dual™ RNA-hTLR3（HKD-RNA-TLR3）もご用意がございます。

THP-1（ヒト単球由来）

細胞品名（品番）	改変RLR遺伝子	パスウェイ	レポーター遺伝子名	コントロールリガンド例（品番）
THP1-Dual™ KO-RIG-I （THPD-KORIGI）	RIG-I（KO）	NF-κB, IRF	SEAP, Lucia luciferase	5’ppp-dsRNA（TLRL-3PRNA） 3p-hpRNA（TLRL-HPRNA）
THP1-Dual™ KO-MDA5 （THPD-KOMDA5）	MDA5（KO）	NF-κB, IRF	SEAP, Lucia luciferase	Poly(I:C) (HMW) / LyoVec™ （TLRL-PICLV） Poly(I:C) (LMW) / LyoVec™ （TLRL-PICWLV）
THP1-Dual™ KO-MAVS （THPD-KOMAVS）	MAVS（KO）	NF-κB, IRF	SEAP, Lucia luciferase	RIG-IとMDA5の項目を参照

A549（ヒト肺がん由来）

細胞品名（品番）	改変RLR遺伝子	パスウェイ	レポーター遺伝子名	コントロールリガンド例（品番）
A549-Dual™ KO-RIG-I （A549D-KORIGI）	RIG-I（KO）	NF-κB, IRF	SEAP, Lucia luciferase	5’ppp-dsRNA（TLRL-3PRNA） 3p-hpRNA（TLRL-HPRNA）
A549-Dual™ KO-MDA5 （A549D-KOMDA5）	MDA5（KO）	NF-κB, IRF	SEAP, Lucia luciferase	Poly(I:C) (HMW) / LyoVec™（TLRL-PICLV） Poly(I:C) (LMW) / LyoVec™ （TLRL-PICWLV）
A549-Dual™ KO-MAVS （A549D-KOMAVS）	MAVS（KO）	NF-κB, IRF	SEAP, Lucia luciferase	RIG-IとMDA5の項目を参照

RAW 264.7（マウスマクロファージ由来）

細胞品名（品番）	改変RLR遺伝子	パスウェイ	レポーター遺伝子名	コントロールリガンド例（品番）
RAW-Lucia™ ISG-KO-RIG-I （RAWL-KORIGI）	RIG-I（KO）	IRF	Lucia luciferase	5’ppp-dsRNA（TLRL-3PRNA） 3p-hpRNA（TLRL-HPRNA）
RAW-Lucia™ ISG-KO-MDA5 （RAWL-KOMDA5）	MDA5（KO）	IRF	Lucia luciferase	Poly(I:C) (HMW) / LyoVec™（TLRL-PICLV） Poly(I:C) (LMW) / LyoVec™（TLRL-PICWLV）
RAW-Lucia™ ISG-KO-MAVS （RAWL-KOMAVS）	MAVS（KO）	IRF	Lucia luciferase	RIG-IとMDA5の項目を参照

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商品ラインアップ

細胞株

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
HEK-Dual^TM RNA-Null	ING	HKD-RNA-NULL	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
HEK-Dual^TM RNA-hRIG-I	ING	HKD-RNA-RIGI	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
HEK-Dual^TM RNA-hMDA5	ING	HKD-RNA-MDA5	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
HEK-Lucia^TM RIG-I Cells	ING	HKL-HRIGI	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	￥376,000
THP1-Dual^TM KO-RIG-I Cells	ING	THPD-KORIGI	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
THP1-Dual^TM KO-MDA5 Cells	ING	THPD-KOMDA5	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
THP1-Dual^TM KO-MAVS Cells	ING	THPD-KOMAVS	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
A549-Dual^TM KO-RIG-I Cells	ING	A549D-KORIGI	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
A549-Dual^TM KO-MDA5 cells	ING	A549D-KOMDA5	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
A549-Dual^TM KO-MAVS cells	ING	A549D-KOMAVS	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
RAW-Lucia^TM ISG-KO-RIG-I Cells	ING	RAWL-KORIGI	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
RAW-Lucia^TM ISG-KO-MDA5 Cells	ING	RAWL-KOMDA5	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ
RAW-Lucia^TM ISG-KO-MAVS Cells	ING	RAWL-KOMAVS	1 VIAL [3-7 x 10e6 cells]	お問い合わせ