記事ID ： 43150

SARS-CoV-2 SpikeとACE2受容体の結合阻害剤のスクリーニングに SARS-CoV-2 Spike S1/ACE2 Binding, Inhibitor Screening Kit

図1. SARS-CoV-2 感染機構（細胞侵入機構）

世界的に大流行している新型コロナウイルス感染症（COVID-19）の原因ウイルス（SARS-CoV-2）の細胞への感染は、ウイルス膜表面から突出したSpike タンパク質が体細胞のアンジオテンシン変換酵素2（ACE2）受容体に結合することから始まります（図1）¹。Spikeタンパク質は２つのサブユニットから構成され、S1 サブユニットはACE2 受容体との結合、S2 サブユニットはウイルス膜と細胞膜の融合に関与します²。本キットはSpike タンパク質S1 サブユニットとACE2 受容体タンパク質の結合を、リコンビナントタンパク質を用いて測定可能なキットです。被験物質存在下における結合能を測定することで、阻害剤の探索を行うことができます。

マルチウェルプレート上にヒトACE2タンパク質(ACE2-His tag)を固相化し、SARS-CoV-2 Spike タンパク質S1サブユニット(S1-Fc tag)を結合させます。ACE2-His tagタンパク質とS1-Fc tagタンパク質の結合は、Anti-Mouse IgG-HRP を用いて検出します。S1-Fc tag タンパク質反応時に被験物質を共に添加することで、被験物質による結合阻害活性を評価することが可能です(図2)。

図2. 本キットの測定原理

特長

リコンビナントタンパク質と抗体を用いたシンプルな検出系
阻害剤のポジティブコントロールをセット
安定した測定系と高い再現性

構成内容

ACE2-His tag（リコンビナントタンパク質）
S1-Fc tag（リコンビナントタンパク質）
Anti-Mouse IgG HRP（抗体）
Assay Buffer
Wash Buffer
Substrate Solution（TMB)
Stop Solution（0.6N H₂SO₄）
Inhibitor Control（ε-poly-L-lysin）

（Ni コート 96 ウェルプレートは含まれておりません。ご用意ください。）

測定例

図3　様々なサンプルによる測定例
市販発酵食品抽出液および市販歯磨抽出液をそれぞれ段階希釈（0.16、0.8、4、20%）してサンプル溶液とし、S1/ACE2タンパク質の結合阻害活性を比較した。測定値はサンプル添加なしの場合を1とした相対値で表記した。

参考文献

Shang, J. et al. Cell entry mechanisms of SARS-CoV-2. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 117, 11727-11734 (2020)
Huang, Y., Yang, C., Xu, X. feng, Xu, W. & Liu, S. wen. Structural and functional properties of SARS-CoV-2 spike protein: potential antivirus drug development for COVID-19. Acta Pharmacol. Sin. 41, 1141-1149 (2020)
Yoshizato, K.et al. Cloaking the ACE2 receptor with salivary cationic proteins inhibits SARS-CoV-2 entry. The Journal of Biochemistry. mvac054,https://doi.org/10.1093/jb/mvac054(2022)