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細胞の脂肪酸取り込みを簡単にモニター！ Screen Quest™ 蛍光脂肪酸取り込みアッセイ

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メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

Screen Quest™蛍光脂肪酸取り込みアッセイは、脂肪酸トランスポーターを含むことが知られている細胞の脂肪酸取り込みを簡単にモニターするためのキットです。本アッセイは、独自のドデカン酸蛍光脂肪酸基質を利用しています。

背景

脂肪酸の取り込みは、肥満、2型糖尿病、および肝狭窄などの多くのヒト代謝障害の新規治療法を開発するための有望な治療標的です。例えば、創薬研究において、脂肪酸トランスポーターを含有する細胞における脂肪酸取り込みの定量分析は、新規薬物化合物のアゴニスト効果およびアンタゴニスト効果の特性評価を可能にします。

特長

簡単：mix and-readフォーマットでHTSアプリケーションに適応
便利：96ウェルまたは384ウェルのマイクロタイタープレートに対応
分析機器：Ex/Em = 485/515 nm（下方測定モード）またはFITCチャネルを有する蛍光マイクロプレートリーダー

構成内容

Component A: TF2-C12 Fatty Acid 1 vial, lyophilized
Component B: Assay Buffer 10 mL
Component C: DMSO 100 µL

プロトコール概要 (For one 96-well plate)

細胞を成長培地で4-6時間培養。
1時間細胞を剥離させ、用途に応じて処理する。
脂肪酸ダイローディング試薬を添加
蛍光強度をEx/Em = 485/515 nm 測定する。キネティックアッセイの場合は即時に、エンドポイントアッセイの場合はボトムリードモードで60分インキュベーション後に測定する。

製品データ

図.1 3T3-L1脂肪細胞と線維芽細胞による脂肪酸の取り込み比較
細胞をpoly-D コート96ウェル黒色クリアボトムプレートに50,000 cells/100 µL/well播種し、5時間静置後、血清を除去し1時間静置。細胞をインスリンなし（コントロール）またはインスリンあり（150 nM）で処理し、37℃, 5% CO₂インキュベーターにて30分静置。インキュベーション時間の終わりに、100 µlの脂肪酸混合物をウェルに添加し、さらに60分間インキュベートした後、FlexStationプレートリーダー（ボトムリードモード）で蛍光シグナルを測定した。
A -線維芽細胞(コントロール), B -線維芽細胞(インスリン)
C -脂肪細胞(コントロール), D -脂肪細胞(インスリン)