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本キットは、細胞内カルシウム動態を検出するためのカルシウム指示薬Fluo-4を用いたアッセイキットです。
Fluo-4 AMは細胞内に入ると、エステラーゼによりAM基が切断され、負に荷電したFluo-4蛍光色素が産生されます。細胞がスクリーニング化合物で刺激されて細胞内カルシウムが上昇すると、Fluo-4にカルシウムが結合し、蛍光強度が増大します。本キットは、G-タンパク質共役型受容体（GPCRs）とカルシウムチャネルのモニタリングに最適化されたアッセイをご提供します。また便利な96穴または384穴マイクロタイタプレートフォーマットで実行できるので、ハイスループットアッセイや自動化にも応用可能です。
特長
- 洗浄ステップ不要
- 便利なバッファー付きのキット
- プロベネシド添加不要
構成内容
- Component A: Fluo-4 AM
- Component B: 10X Pluronic® F127 Plus
- Component C: HHBS (Hanks’ buffer with 20 mM Hepes)
プロトコール概要
- 増殖培地中で細胞を準備する。
- Fluo-4 AM dye-loading solution（96穴プレートには100μL/穴、384穴プレートには25μL/穴）を添加する。
- 37℃で1時間培養する。
- 蛍光強度をEx/Em = 490/525 nm で観察する。
[注意事項]
追加でプロベネシドを添加しないこと。使用前に全てのキット内容物を室温で解凍すること。
主要なパラメーター
| 機器 | 蛍光マイロプレートリーダー |
|---|---|
| 励起 | 490 nm |
| 蛍光 | 525 nm |
| カットオフ | 515 nm |
| 推奨プレート | Black wall/Clear bottom |
| 機器の仕様 | Bottom read mode/Programmable liquid handling |
データ例
図1. CHO-K1細胞におけるATP用量反応
CHO-K1細胞をCostarの96穴Black wall/Clear bottomプレートに40,000 細胞/100μL/穴で播種して一晩培養した。細胞は、100μLのdye-loading solutionとともに室温で1時間培養し、表記した最終濃度になるようATP（50μL/穴）をFlexstation 3（Molecular Devices）により添加した。
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
Screen QuestTM Fluo-4 No Wash Calcium Assay Kit |
ABD | 36325 | 10 PLATE |
￥96,000 |
| Screen QuestTM Fluo-4 No Wash Calcium Assay Kit |
ABD | 36326 | 100 PLATE |
お問い合わせ |
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
※ 表示価格について
- 「Screen Quest™ Fluo-4 No Wash カルシウムアッセイキット」は、下記のカテゴリーに属しています。
