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HATセレクションとクローニングを同時に！ハイブリドーマ用半固形培地(HAT 添加) HDO-01

メーカー名：バイオアカデミア株式会社

BHDO-01 (Semi-solid Medium for Hybridoma with HAT)

ハイブリドーマを作製する際のHATセレクションとクローニングを同時に行うための専用培地(カルボキシメチルセルロースベースの半固形培地)です。従来の方法ではHATセレクションとクローニングに約1ヵ月ほどかかるところ、HDO-01を使用すると14日間に短縮できます。

使用方法

図1. HDO-01培地使用方法の概略

【使用方法】
1) 細胞融合後、回復培地でovernight 培養したハイブリドーマを回収して10 mL の細胞懸濁液を調製する。
　細胞数は1×10^7～5×10⁷の範囲にする。
2) 90 mLのHDO-01に10 mL の細胞懸濁液を添加し、キャップを閉めて数回転倒撹拌する。
3) 気泡を除去するために、37℃の CO₂ インキュベータ内で 10 分間静置する。
4) 16G のブラント針を装着した10mLのシリンジでハイブリドーマ懸濁HDO-01を10mL分取し、
　 100mm細胞培養ディッシュに気泡が入らないようにアプライする。
5) ハイブリドーマのコロニーが目視できるまで 14 日間培養する。
6) シングルコロニーを10～20µLの培地ごとピペットで吸い取り、ハイブリドーマ培養用の培地を入れた96 穴プレートに
　移して培養する。

図2．培養 14 日目のコロニー形成の様子
60mm 細胞培養ディッシュで 14 日間培養した。目視でハイブリドーマのシングルコロニーが見えるようになる。