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商品情報

記事ID : 34514
研究用

標的に有効なshRNA/miRNAの探索からウイルス作製まで幅広くサポートshRNA/miRNA発現アデノ随伴ウイルス(AAV) / アデノウイルス(AdV)作製受託サービス
SignaGen社:標的に有効なshRNA/miRNAの探索からウイルス作製まで幅広くサポート

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SignaGen社shRNA/miRNA ウイルス作製サービスでは、標的のノックダウンに有用なshRNA/miRNA配列の獲得及びベクターの構築から独自技術による高タイターAAV/AdV作製まで、ノックダウン用AAV/AdV作製を幅広くサポートします。
CRISPR-Cas9によるノックアウト用AAV/AdV作製も可能です。詳細はページ下部の創薬・受託サービス部までお問い合わせください。

参考情報

特長

  • 独自技術により高タイターでAAV/AdVを作製(AAV:>1013 VG/mL, AdV:>5x1010
  • バリデーションサービスにより、標的遺伝子のノックダウンに有用なshRNA/miRNA配列の獲得が可能
  • 多様なプロモーター・レポーターを選択可能(図1、図2)
  • dsAAVベクターも使用可能
  • AAVは多様なセロタイプで作製可能
    (AAV1〜9, AAV-PHP.B, AAV-PHP.eB, AAV-DJ/8, AAV-DJ)

※上記以外のセロタイプも対応可能です。詳細はページ下部の創薬・受託サービス部までお問い合わせください。

サービス一覧

 

shRNA /miRNAバリデーションサービス

標的遺伝子に対して80%以上のノックダウン効率を示すshRNA/miRNA配列を獲得するサービスです。

作業内容

  • ①標的遺伝子をCis-plasmidまたはアデノウイルスシャトルベクターにクローニング
  • ②最大 6 種のshRNA / pre-miRNAをデザイン・合成し、上記ベクター(図1、①)にクローニングしてバリデーション用プラスミドを構築
  • ③構築したバリデーション用プラスミドをHEK293細胞へトランスフェクション
  • ④GFP 発現もしくはルシフェラーゼ活性を指標に、標的遺伝子のサイレンシングを定量
    ※80%以上のノックダウン効率を示す配列が得られなかった場合は②のデザインから再度やり直し、条件を満たす配列が得られるまで繰り返す

shRNAバリデーションサービスのフロー(AAV)
図1. shRNAバリデーションサービスのフロー(AAV)

〈納品物〉

デザイン・合成した6種のshRNA/miRNA発現用プラスミドとバリデーションのデータ

 

shRNA/miRNA ウイルス作製受託サービス

shRNA/miRNAのデザインからベクターの構築、ウイルスのパッケージングまで行うサービスです。

作業内容

アデノ随伴ウイルス(AAV)

  • shRNA/miRNAのデザイン及びCis-plasmidの構築、AAVへのパッケージング
  • 2×CsCl超遠心によるAAVの濃縮
  • qPCRによるAAVのタイトレーション

アデノウイルス(AdV)

  • shRNA/miRNAのデザイン及びアデノウイルスベクターの構築、Ad.MAX™ 293 細胞を使用してアデノウイルスストックの作製
  • 2×CsCl超遠心によるアデノウイルス精製(Large scale のみ)
  • リコンビナントアデノウイルスの PFU測定

ベクターのITR間の配列は、以下の中からご希望のプロモーター、レポーター、セレクションマーカーをお選び頂けます。

ベクターのITR間の配列
Promoter 1 Promoter 2 Reporter
None ELA1 None None
CMV Enh358MCK CMV eGFP
CAG cTNT CAG RFP
H1 GFAP H1 mRFP
U6 MBP U6 mCherry
Synapsin SST Synapsin tdTOMATO
UBC TBG UBC TurboGFP
EF1a aMHC EF1a eYFP
ALB(1.4) hRPE CaMKII Venus
ApoE/AAT1 mlP1 cTNT Luc
CaMKII tMCK GFAP LacZ

図.2 Cis-plasmid / アデノウイルスシャトルベクターの構造

作製容量に応じて以下の3種類のスケールで対応しております。

アデノ随伴ウイルス(AAV)
Scale 濃度(※1) 容量(※2) 納期 グレード
Large >1×1013 VG/mL 1 mL (10 × 100 µL) 4〜5週間
(※3)
in vivo
Medium >1×1013 VG/mL 200 µL (5 × 40 µL)
Pilot >1×1013 VG/mL 100 µL (2 × 50 µL)
アデノウイルス(AdV)
Scale 濃度(※1) 容量(※2) 納期 グレード
Large >5×1010
>5×1011 PFU/mL
2 mL
(10 × 200 µL)
4〜5週間
(※3)
in vivo
Medium >5×1010
>5×1011 PFU/mL
2 mL
(10 × 200 µL)
in vitro
Pilot >5×1010
>5×1011 PFU/mL
1 mL
(5 × 200 µL)

※1:最終的なウイルス産生量はshRNA/miRNAの性質に依存します。

※2:上記以上のスケールも対応可能です。

※3:shRNA/miRNA配列の合成をSignaGen社にご依頼頂く場合、納期は都度見積もりとなります。

 

shRNA/miRNA ウイルスパッケージングサービス

お送り頂いたshRNA/miRNA発現用のCis-plasmidまたはアデノウイルスベクターを使用し、ウイルスのパッケージングを行うサービスです。

作業内容

アデノ随伴ウイルス(AAV)

  • お送り頂いたCis-plasmidを使用したAAVのパッケージング
  • 2×CsCl超遠心によるAAVの濃縮
  • qPCRによるAAVのタイトレーション

アデノウイルス(AdV)

  • Ad.MAX™ 293 細胞を使用してアデノウイルスストックの作製
  • 2×CsCl超遠心によるアデノウイルス精製(Large scale のみ)
  • リコンビナントアデノウイルスの PFU測定

作製容量に応じて以下の3種類のスケールで対応しております。

アデノ随伴ウイルス(AAV)
Scale 濃度(※1) 容量(※2) 納期 グレード
Large >1×1013 VG/mL 1 mL (10 × 100 µL) 3〜4週間 in vivo
Medium >1×1013 VG/mL 200 µL (5 × 40 µL)
Pilot >1×1013 VG/mL 100 µL (2 × 50 µL)
アデノウイルス(AdV)
Scale 濃度(※1) 容量(※2) 納期 グレード
Large >5×1010
>5×1011 PFU/mL
2 mL
(10 × 200 µL)
4〜5週間 in vivo
Medium >5×1010
>5×1011 PFU/mL
2 mL
(10 × 200 µL)
in vitro

※1:最終的なウィイルス産生量はshRNA/miRNAの性質に依存します。

※2:上記以上のスケールも対応可能です。

 

お見積り・ご注文方法

下記のリンクから見積のご依頼をお願い致します。

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