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SignaGen社shRNA/miRNA ウイルス作製サービスでは、標的のノックダウンに有用なshRNA配列の獲得及びベクターの構築から独自技術による高タイターAAV/AdV作製まで、ノックダウン用AAV/AdV作製を幅広くサポートします。CRISPR-Cas9によるノックアウト用AAV/AdV作製も可能です。詳細はページ下部の創薬・受託サービス部までお問い合わせください。
記事ID ： 34514
標的に有効なshRNA/miRNAの探索からウイルス作製まで幅広くサポート shRNA/miRNA発現アデノ随伴ウイルス(AAV) / アデノウイルス(AdV)作製受託サービス
SignaGen社：標的に有効なshRNA/miRNAの探索からウイルス作製まで幅広くサポート
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特長
- 独自技術により高タイターでAAV/AdVを作製（AAV：>1013 VG/mL, AdV:>5x1010）
- バリデーションサービスにより、標的遺伝子のノックダウンに有用なshRNA配列の獲得が可能
- 多様なプロモーター・レポーターを選択可能（図1、図2）
- dsAAVベクターも使用可能
- AAVは多様なセロタイプで作製可能
（AAV1〜9, AAV-PHP.B, AAV-PHP.eB, AAV-DJ/8, AAV-DJ）
※上記以外のセロタイプも対応可能です。詳細はページ下部の創薬・受託サービス部までお問い合わせください。
サービス一覧
- shRNA バリデーションサービス
：ノックダウン検証済みのshRNA配列が無い場合 - shRNA ウイルス作製受託サービス
：ノックダウン検証済みのshRNA配列がある場合 - shRNA/miRNA ウイルスパッケージングサービス
：ノックダウン検証済みのshRNA配列発現用Cis-plasmidまたはアデノウイルスベクターをお持ちの場合
標的遺伝子に対して80%以上のノックダウン効率を示すshRNA配列を獲得するサービスです。
作業内容
- ① 標的遺伝子 (GOI) をウイルスシャトルベクターにクローニング
- ② 最大6種のshRNA をデザイン・合成し、①とは異なるベクターにクローニング
- ③ 前工程で構築した2種のプラスミドをHEK293細胞へトランスフェクション
- ④ mCherry発現を指標に、標的遺伝子のサイレンシングを定量
※80%以上のノックダウン効率を示す配列が得られなかった場合は、条件を満たす配列が得られるまで繰り返します。
図1. shRNAバリデーションサービスのフロー(AAV)
〈納品物〉
デザイン・合成した6種のshRNA発現用プラスミドとバリデーションのデータ
shRNAのデザインからベクターの構築、ウイルスのパッケージングまで行うサービスです。
作業内容
アデノ随伴ウイルス（AAV）
- shRNAのデザイン及びCis-plasmidの構築、AAVへのパッケージング
- 2×CsCl超遠心によるAAVの濃縮
- qPCRによるAAVのタイトレーション
アデノウイルス（AdV）
- shRNAのデザイン及びアデノウイルスベクターの構築、Ad.MAX™ 293 細胞を使用してアデノウイルスストックの作製
- 2×CsCl超遠心によるアデノウイルス精製（Large scale のみ）
- リコンビナントアデノウイルスの PFU測定
ベクターのITR間の配列は、以下の中からご希望のプロモーター、レポーター、セレクションマーカーをお選び頂けます。
| Promoter 1 | Promoter 2 | Reporter | |
| None | ELA1 | None | None |
| CMV | Enh358MCK | CMV | eGFP |
| CAG | cTNT | CAG | RFP |
| H1 | GFAP | H1 | mRFP |
| U6 | MBP | U6 | mCherry |
| Synapsin | SST | Synapsin | tdTOMATO |
| UBC | TBG | UBC | TurboGFP |
| EF1a | aMHC | EF1a | eYFP |
| ALB(1.4) | hRPE | CaMKII | Venus |
| ApoE/AAT1 | mlP1 | cTNT | Luc |
| CaMKII | tMCK | GFAP | LacZ |
図.2 Cis-plasmid / アデノウイルスシャトルベクターの構造
作製容量に応じて以下の3種類のスケールで対応しております。
| Scale | 濃度(※1) | 容量(※2) | 納期 | グレード |
|---|---|---|---|---|
| Large | >1×1013 VG/mL | 1 mL (10 × 100 µL) | 4〜5週間 (※3) |
in vivo |
| Medium | >1×1013 VG/mL | 200 µL (5 × 40 µL) | ||
| Pilot | >1×1013 VG/mL | 100 µL (2 × 50 µL) |
| Scale | 濃度(※1) | 容量(※2) | 納期 | グレード |
|---|---|---|---|---|
| Large | >5×1010 〜 >5×1011 PFU/mL |
2 mL (10 × 200 µL) |
4〜5週間 (※3) |
in vivo |
| Medium | >5×1010 〜 >5×1011 PFU/mL |
2 mL (10 × 200 µL) |
in vitro | |
| Pilot | >5×1010 〜 >5×1011 PFU/mL |
1 mL (5 × 200 µL) |
※1：最終的なウイルス産生量はshRNAの性質に依存します。
※2：上記以上のスケールも対応可能です。
※3：shRNA配列の合成をSignaGen社にご依頼頂く場合、納期は都度見積もりとなります。
お送り頂いたshRNA/miRNA発現用のCis-plasmidまたはアデノウイルスベクターを使用し、ウイルスのパッケージングを行うサービスです。
作業内容
アデノ随伴ウイルス（AAV）
- お送り頂いたCis-plasmidを使用したAAVのパッケージング
- 2×CsCl超遠心によるAAVの濃縮
- qPCRによるAAVのタイトレーション
アデノウイルス（AdV）
- Ad.MAX™ 293 細胞を使用してアデノウイルスストックの作製
- 2×CsCl超遠心によるアデノウイルス精製（Large scale のみ）
- リコンビナントアデノウイルスの PFU測定
作製容量に応じて以下の3種類のスケールで対応しております。
| Scale | 濃度(※1) | 容量(※2) | 納期 | グレード |
|---|---|---|---|---|
| Large | >1×1013 VG/mL | 1 mL (10 × 100 µL) | 3〜4週間 | in vivo |
| Medium | >1×1013 VG/mL | 200 µL (5 × 40 µL) | ||
| Pilot | >1×1013 VG/mL | 100 µL (2 × 50 µL) |
| Scale | 濃度(※1) | 容量(※2) | 納期 | グレード |
|---|---|---|---|---|
| Large | >5×1010 〜 >5×1011 PFU/mL |
2 mL (10 × 200 µL) |
4〜5週間 | in vivo |
| Medium | >5×1010 〜 >5×1011 PFU/mL |
2 mL (10 × 200 µL) |
in vitro |
※1：最終的なウィイルス産生量はshRNA/miRNAの性質に依存します。
※2：上記以上のスケールも対応可能です。
お見積り・ご注文方法
下記のリンクから見積のご依頼をお願い致します。
受託サービスに関するご相談
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
※ 表示価格について
