Illumina プラットフォームでの次世代シーケンシングに！ Small RNA ライブラリー調製キット(イルミナ社機器用)

本キットは、Illumina プラットフォームでの次世代シーケンシングに使用できる Small RNA ライブラリーを調製するキットです。

アダプター、プライマー、酵素ミックス、バッファー等の必要な構成品が含まれています。また、ワークフローのさまざまなステップで生成された核酸産物を迅速に精製するためのClean-Up Kitもキットに含まれています。このClean-Up Kit では、目的のライブラリー中間体または最終生成物の回収率を高めるNorgen社独自の特許樹脂技術を利用しています。
ライブラリー調製には、精製されたTotal RNA や濃縮された small RNA だけでなく、血漿、血清、尿などのRNA低含有サンプルもインプットとしてご使用できます。

• 低インプット RNAに最適（特に 1 ng の血漿や血清などの体液からの RNA 用に）
• シンプルで迅速なワークフロー（ライブラリは 5 時間以内に調製できます。）
• 血液、血漿、血清、尿等のリキッドバイオプシーを含む様々なタイプのサンプルを使用可能
• Norgen社独自のTotal RNA (microRNA を含む) 精製技術を利用

index primer1-48の配列はデータシートをご確認ください。

図3. RNA 量が少ないリキッドバイオプシーサンプルから構築された small RNA (microRNA) シーケンスライブラリーの優れた再現性
Norgen社 の血漿/血清 RNA 精製ミニキット (品番： 55000) を使用して、200 µL の EDTA 血漿からTotal RNA を調製した。Small RNA Library Prep Kit for Illumina (品番： 63600) を使用して、ゲル精製を使用せず、精製 RNA から Small RNA ライブラリー (4 つの複製) を調製した (調製時間約 5 時間)。 得られたライブラリーは、v3 chemistryを使用して イルミナ社 の MiSeq システムで配列決定した。 リードはmicroRNAにマッピングされ、100万あたりのリードに正規化された。 すべての複製間のmicroRNA発現のペアワイズ比較を実行し、すべての反復実験で平均 99% 以上の高い相関 (再現性) が観察された。

図4. Total RNA 精製技術の組み合わせによる全血および保存血液から精製した RNA からのsmall RNA (microRNA) シーケンシング ライブラリ調製が示す安定した品質
Total RNA は、全血から調製するか、Norgen社 Total RNA Purification Plus Kit (品番： 48300)、Preserved Blood RNA Purification Kit II (Paxgene™ Blood RNA Tubes 用) (品番：43500) を使用して Paxgene™ または Tempus™ 血液チューブに収集した。または Preserved Blood RNA Purification Kit I (Tempus™ Blood RNA Tubes 用) (品番： 43400) を使用した。 Small RNA Library Prep Kit for Illumina (品番： 63600) を使用して、精製 RNA から Small RNA ライブラリーを調製した。 得られたライブラリーは、v3 chemistryを使用して イルミナ社 の MiSeq システムで配列決定された。 リードはmicroRNAにマッピングされ、100万あたりのリードに正規化された。 すべての複製間のmicroRNA発現のペアワイズ比較を実行した。 各チューブすべての複製において、平均 99% 以上の高い相関 (または再現性) が観察された (パネル A)。 さらに、3 種類の血液サンプルすべてで、同様の数のmicroRNA が検出され (パネル B)、発現プロファイルの相関性が高かった (パネル C)。

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