アダプターダイマーを作成！ゲルフリーでライブラリー作製を行うことができます NEXTflex ® Small RNA Sequencing kit v3（Illumina 社対応）

NEXTflex® Small RNA Sequencing kit v3 は、small RNA ライブラリーを調製するためのキットです。

従来品と同様にランダム化アダプターでライゲーションバイアスを低減したサンプル調製が可能です。また、アダプターダイマー形成を大幅に低減したことで、200ng 以上のトータルRNAの場合、PAGEによるゲル精製が不要となりました（ゲルフリープロトコール）。

また、従来の24 反応分のキットに代わり、8 反応分の小サイズキットをご用意しております。

• 完全ゲルフリープロトコール
• より正確なデータを得るために、ランダム化アダプターでライゲーションバイアスを低減
• 高いdiscovery/detection 比率でシーケンシングコストを削減
• 大きなシーケンス深度を実現する、AIR™ リガーゼを利用
• 少量サンプルに対応（必要トータルRNA量 1ng-2µg）
• サンプル容量（体積）10.5µLまで使用可能
• 最大48サンプルのマルチプレックス化が可能なバーコードプライマーが付属
• Illumina®シーケンシングプラットフォームで検証済

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• 特集：次世代シーケンシング The NGS Experts™

「Small RNA シーケンシング」手法の問題点、解決策を解説！

バイアスを低減するランダム化アダプター

The NEXTflex® Small RNA-Seq Kit v3 は、特許出願中／特許取得済みの技術を利用し、ゲルフリーかつ低インプット量で Illumina社シーケンシングに対応するsmall RNA ライブラリーを調製することができます。ライゲーション部位にランダム塩基を持つランダム化アダプター（表1）を用いることで、標準的なプロトコールよりも大幅にライゲーションバイアスが低減され、用いた検体中のsmall RNA 存在量をより正確に示すことができます。さらに、少ない合計リード数でより多くのmiRNAを検出することができるため、small RNA シーケンシングの効率が高く、コストの削減が可能です。

NEXTflex® Small RNA-Seq kit v3 を用いることで、他社製品よりも高い割合のリードがmiRNAにマッピングされました（図1）。

図1. Small RNA ライブラリーは、ヒト脳由来トータルRNAサンプルから調製し、Illumina社MiSeqを用いてシーケンスした。各ライブラリーのリード数と≥20リードのmiRNA集団を示した。Next flexで作製したライブラリは、他社商品で作製したライブラリに比べ、より少ないリード数で20リード以上のmiRNA100種類を検出した。

ゲルフリープロトコール

本製品は、アダプターダイマー形成を大幅に抑制したことによって、従来法と異なり、ポリアクリルアミドゲル（PAGEゲル）精製無しでの small RNAライブラリー調製が可能となりました。≥200 ngのトータルRNAからsmall RNA ライブラリーを調製する際、完全なゲルフリープロトコールで実施することができます。

少ないインプット量で、Illumina社対応のsmall RNAライブラリー調製が可能

本製品に組み込まれたアダプターダイマー抑制技術によって、少ないインプット量からのライブラリー調製が可能となります。ライブラリー調製はわずか1 ngのトータルRNAから可能です。図2は、異なるインプット量のサンプル間で、同様の発現量のデータを再現可能であることを示します。

図2. 本製品を用いて、異なる量のヒト脳由来トータルRNAサンプル（10 ngと100ng）からライブラリ作製し、解析した際の各ライブラリのmiRNA発現量の相関性。

RNA-Seq のマルチプレックス化を実現

NEXTflex® Small RNA-Seq Kit v3には、8種類または48種類のバーコードプライマーがあらかじめ含まれており、個別に購入する必要はありません。

他社製品との比較

	NEXTflex Small RNA-Seq Kit v3	I 社キット	N 社キット
バイアスの低減		×	×
ゲルフリープロトコール		×
少ないインプット量	（1 ng total RNA）	×	×
全酵素が付属		×
マルチプレックス化用バーコード	48	48	24
最大インプット量 (μL)	10.5	5	6
完全自動化対応		×	×
ひとつのキットで全サンプルをマルチプレックス化		×	×
Discovery/detection 比率	高	低	中

• NEXTflex® 3’ 4N アデニル化アダプター
• NEXTflex® 3’ ライゲーションバッファー
• NEXTflex® 3’ ライゲーション酵素ミックス
• NEXTflex® Adapter Depletion Solution
• NEXTflex® アダプター不活性化バッファー
• NEXTflex® アダプター不活性化酵素
• NEXTflex® 5’ 4N アダプター
• NEXTflex® 5’ ライゲーションバッファー
• NEXTflex® 5’ ライゲーション酵素ミックス
• M-MuLV 逆転写酵素
• NEXTflex® RT バッファー
• NEXTflex® ユニバーサルプライマー
• NEXTflex® バーコードプライマー 1-8^*
• NEXTflex® Small RNA PCR マスターミックス
• 6X ローディング色素
• Ready to Load Low MW ラダー
• Resuspension バッファー
• Nuclease-free 精製水
• microRNA コントロール
• NEXTflex® クリーンアップビーズ
• NEXTflex® 溶出バッファー

^*バーコード 1, 2, 4, 5, 9, 10, 12, 19

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