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最大20kbの標的遺伝子を効率的にノックイン！ TARGATT™ 部位特異的遺伝子ノックインシステム
Applied StemCell社：最大20kbの標的遺伝子を効率的にノックイン！

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メーカー名：Applied StemCell, Inc.

TARGATT™はApplied StemCell社がスタンフォード大学からライセンスを取得しているゲノム編集技術であり、最大20 kbもの標的遺伝子を高い導入効率でノックインすることができます。

特長

ノックイン効率最大40%
最大20 kbの配列を導入可能
部位特異的な遺伝子挿入
抗体・タンパク質発現系としても利用可能

原理

ベクターに挿入された 34 bp のアタッチメントサイト attB 配列と宿主 (細胞、マウス、ラット) ゲノム中に挿入された attP 配列間を組み換えることで、目的遺伝子を部位特異的に導入する手法です（図1）。Applied StemCell社ではセーフハーバー領域（H11, Rosa26）にattP配列を組み込んだ細胞、マウス、ラットを構築しており（表1）、CRISPR/Cas9では困難な最大20kbもの目的遺伝子を短期間で導入することができます。

図1 . TARGATT™ 部位特異的遺伝子ノックインシステム

attP配列導入済み動物および細胞種

	H11*	Rosa26
Mouse (C57BL/6J)	〇	〇
Mouse (FVB)	〇	〇
Rat (Sprague-Dawley)	〇
iPS細胞	〇
HEK293T細胞	〇
CHO-S細胞	〇

表１．attP配列導入済み動物および細胞種
*H11 LocusはApplied StemCell社によりタンパク質が安定的に高発現することが確認されたセーフハーバー領域です。

実施例

HEK293細胞へのmCherry発現遺伝子の挿入

図2. HEK293細胞H11領域へのmCherryタンパク質発現遺伝子の挿入

H11領域にattP配列を組み込んだHEK293T TARGATT Master Cell LineにmCherryタンパク質発現遺伝子を挿入した（左）。トランスフェクション後72時間時点で40%以上の細胞でmCherryタンパク質発現が確認された（右）。また、抗生物質でのセレクション後では約90%の細胞でmCherryタンパク質発現が確認された。

ご利用方法

アッセイサービス

ご指定の遺伝子配列を導入して、導入済みマウス、ラットもしくは細胞株をご提供いたします。金額や詳細については、お問い合わせください。

ご自身で遺伝子導入を行う場合（マウス）

以下4点をご購入いただく必要がございます。金額や詳細については、お問い合わせください。

attP導入済みマウス
ノックインプラスミド
TARGATT™ Transgenic Kit
Genotyping Kit

ご自身で行う場合（HEK293細胞もしくはCHO細胞）

以下のTARGATT Master Cell Line (HEK293 or CHO) & Knock-In Kitをご購入ください。金額等については、お問い合わせください。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
TARGATT^TM HEK293 Master Cell Line and Knock-in Kit	ASC	AST-1305	1 KIT	お問い合わせ
TARGATT^TM CHO-S Master Cell Line and Knock-In Kit	ASC	AST-1200	1 KIT	お問い合わせ
TARGATT^TM CHO-K1 (H11) Master Cell Line and Knock-In Kit	ASC	AST-1400	1 KIT	お問い合わせ
TARGATT^TM CHO-K1 (A2) Master Cell Line and Knock-In Kit	ASC	AST-1405	1 KIT	お問い合わせ

［技術説明］

Zhu, F., et al. (2014). Nucleic acids research, 42(5), e34-e34.
Tasic, B., et al. (2011). PNAS USA, 108(19), 7902-7907.

［他のトランスジェニック手法との比較］

Rossant, J., et al. (2011). PNAS USA 108(19), 7659-7660.

［TARGATT™ による Tet 誘導マウスの作製］

Fan, X., et al. (2012).?Endocrinology,?153(11), 5637-5644.

［Hipp11 (H11) 遺伝子座の利点］

Hippenmeyer, S., et al. (2010). Neuron, 68(4), 695-709.

［TARGATT™ により作製されたマウスのアプリケーション］

Park, K. E., et al. (2016). International journal of molecular sciences,17(6), 810.
Guenther, CA., et al. (2014). Nature genetics, 46(7), 748-752
Devine, WP., et al. (2014). eLife, 3, e03848.
Villamizar, C. A. (2014) UT GSBS Dissertations and These (Open Access). Paper 508 (2014)
Fogg, PC., et al. (2014). Journal of molecular biology, 426(15), 2703-2716
Chen-Tsai, RY. (2014) Chinese Science. 59:1-6.

［TARGATT™ マウスモデルの引用文献］

Jiang, T., et al. (2017). eLife, 6
Booze, M. L., et al. (2016). Free Radical Biology and Medicine, 99: 533-543.
Feng, D., et al. (2016). The Journal of Clinical Investigation, 126(6).
Sun, N., et al. (2015). Measuring in vivo mitophagy. Molecular cell, 60(4), 685-696