記事ID ： 16750

E1-E2-E3酵素用活性ベースプローブ UbiQ Probes ‐ Triple E probes™

メーカー名：UbiQ Bio BV

UBQ社の革新的な活性ベースの E1-E2-E3 プローブは、タンパク質ユビキチン化に関連する酵素、薬物ターゲットのバリデート、結晶化を可能にします。プローブは E1-E2-E3 カスケードによるネイティブな過程で処理されます。

また、活性部位システイン残基に不可逆的に反応し、ユビキチン化カスケード中の酵素をトラップします。

図1　メカニズム
Triple E プローブは C末端にデヒドロアラニン（Dha）グループを持ち、生理的 pH では単独で存在し、不活性状態です。しかし E1 酵素により活性化されると、求電子性になります。プローブが E1-E2-E3 カスケードによるネイティブな過程で処理されると、Dha グループは活性部位システイン残基に不可逆的に反応することができ、そのため E1、E2、E3 酵素をトラップすることができます。

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用途

ゲルベース活性タンパク質プロファイリング
セルベースアッセイ
構造生物学
プロテオミクス

製品データ

細胞抽出物の活性型タンパク質プロファイリング

図2　各サンプルに Cy5-Triple E プローブおよび ATP を加え、インキュベートした In-gel 蛍光画像
A) E1 (Uba1)、E2 (Ube2L3)、E3 (ITCH) の混合液
B) 腫瘍細胞株のパネル

セルベースアッセイ

図3a　GFP-UBE1 を異所的に発現させた HeLa 細胞、未発現 HeLa 細胞における Cy5-Ub-Dha（マゼンダ）の分布

図3b　Cy5-Ub-Dha（マゼンダ）を持つ HeLa 細胞中の E2 活性の視覚化
GFP-UbE2J1 = 緑、緑 + マゼンダ = 白、PYR-41 = Uba1 阻害剤

構造生物学

図4　Ub-Dha-UBE2D3 結合の構造解析

プロテオミクス

図5　HeLa 細胞中の Ub ライゲーションのプロテオーム広域活性プロファイリング

FAQ

【01】プローブは E1-E2-E3 酵素のうち、どの酵素をターゲットにしているの？

プローブは E1-E2-E3 いずれの酵素も活性部位システインをターゲットにしています。

【02】 Triple E プローブの直接的なターゲットにならない、システイン触媒部位が欠如している RING クラス E3 酵素についてはどうしたらよいですか?

高安定性の E2-Ub (I)-Dha チオエーテル付加物が RING 型 E3 リガーゼの競合阻害剤として働きます。その為、RING クラス E3 酵素研究に有用です。

【03】プローブは E1-E2-E3 酵素の基質へ転移しますか？

UBQ社が把握している限りでは、Triple E プローブは基質へ転移しません。

【04】標識プローブはどれくらいの特異性を持っていますか？

ユビキチン化カスケード酵素に対して高い特異性を持ちます。ユビキチン（ユビキチン様）基質部位が E1 触媒アデニル化ステップにより活性化するためです。

【05】プローブは細胞溶解液や生細胞で使用できますか？

はい、使えます。図2、図3a、図3b をご覧ください。

【06】プローブはネイティブな方法で処理されますか？

はい、図1をご覧ください。

【07】プローブに他の基質もしくはタグを付けることはできますか？

はい。他の基質はまもなく販売予定です。また既にカスタムオーダーも承っております。

参考文献

A cascading activity-based probe sequentially targets E1–E2–E3 ubiquitin enzymes
Nat Chem Biol. 2016 May 16. doi: 10.1038/nchembio.2084.

Triple E probes™

各種 Triple E probes™
品名	品番	タグ	基質	求電子剤
Ub-Dha	UbiQ-101	-	Ub	Dha
Biotin-Ahx-Ub-Dha	UbiQ-102	Biotin	Ub	Dha
His6-Ahx-Ahx-Ub-Dha	UbiQ-103	His6	Ub	Dha
Cy5-Ub-Dha	UbiQ-104	Cy5	Ub	Dha
5-carboxyRh110-Ub-Dha	UbiQ-131	5-carboxyRh110	Ub	Dha
Nedd8-Dha	UbiQ-105	-	Nedd8	Dha
Biotin-Ahx-Nedd8-Dha	UbiQ-106	Biotin	Nedd8	Dha
5-carboxyRh110-Nedd8-Dha	UbiQ-122	5-carboxyRh110	Nedd8	Dha

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Ub-Dha	UBQ	UBIQ-101	50 UG	￥90,000
Biotin-Ahx-Ub-Dha	UBQ	UBIQ-102	50 UG	￥120,000
His6-Ahx-Ahx-Ub-Dha	UBQ	UBIQ-103	50 UG	￥120,000
Cy5-Ub-Dha	UBQ	UBIQ-104	50 UG	￥137,000
5-carboxyRh110-Ub-Dha	UBQ	UBIQ-131	50 UG	￥137,000
Nedd8-Dha	UBQ	UBIQ-105	50 UG	￥120,000
Biotin-Ahx-Nedd8-Dha	UBQ	UBIQ-106	50 UG	￥128,000
5-carboxyRh110-Nedd8-Dha	UBQ	UBIQ-122	50 UG	￥137,000