糖タンパク質からN-結合型糖鎖を遊離、V-Tag標識！ V-Tag Glycan Release and Labeling Kit

Ludger社のV-Tag Glycan Release and Labeling Kit は、糖タンパク質からN-結合型糖鎖の遊離・標識・精製までを、1個の IgGタイプのサンプルではわずか1時間以内、30個のIgGタイプのサンプルでさえも2時間で完結できます。(ただし、PNGase Fによる遊離のタイミングは 複雑なタイプのサンプルでは調整が必要です)。

本キットで標識した糖鎖は、(U) HPLC分析が可能です。また、V-Tag で一度標識された糖鎖は、構造解析用にエキソグリコシダーゼ処理も可能です。

V-tag色素

本キットは、PNGase F切断後にアミノグリカンを蛍光標識するように設計されています。 アミノグリカンは時間とともに加水分解されてしまうため、PNGase F処理後、ただちに切断された糖鎖に蛍光色素を添加する必要があります。

V-tag 標識された糖鎖は、N-結合型糖鎖に使用される同じHILICモードHPLC または UHPLCクロマトグラフィーを使用して分離することができます。HPLC用のLudgerSep N2 HILICカラム (LS-N2-2.0X150) または UHPLC用Waters BEH Glycan 2mm x 150mm カラムなどが分離に使用できます。

• (U) HPLCを使った糖鎖の解析・定量が可能
• 早くて簡単 : PNGase F処理・標識・精製が短時間で完結
• 適用サンプル：N-結合型糖鎖を含む糖タンパク質および糖ペプチド
  (α1-3結合コアフコースを持つ植物、昆虫および寄生虫などの哺乳類以外の糖鎖は、添付の PNGase Fでは切断できません。別途PNGase A をご使用ください。)
• 標識サンプル数：30サンプル分
• サンプル当たりの必要糖タンパク質量：100 µg
• エキソグリコシダーゼ処理対応 : V-Tag標識糖鎖は、構造解析用にエキソグリコシダーゼ処理も可能

本キットのプレゼンテーションはこちら

• LudgerZyme™ rPNGase F release kit：
  • PNGase F (Elizabethkingia miricola)
  • 10X Glycoバッファー2
  • 10X 糖タンパク質変性バッファー
  • 10% NP-40溶液
• V-tag色素
• DMSO
• LudgerClean™ VSPEカートリッジ
• ギ酸アンモニウムバッファー
• 酢酸アンモニウムバッファー

1. PNGase F による糖鎖遊離
   キットに含まれるPNGase Fキットを使ってタンパク質からN-結合型糖鎖を遊離します。
2. V-tag色素の添加
   PNGase F処理が終了したらすぐに遊離したN-結合型糖鎖にV-tag色素を添加します。各サンプルに標識溶液を添加してください。
3. インキュベート
   標識反応を薦めるためにサンプルをインキュベートします。
4. 標識後のクリーンナップ
   標識後、余分なV-tag色素をキットに入っているカートリッジで除去します。
5. 保存もしくは標識糖鎖の解析
   標識糖鎖をすぐに解析するか、または凍結保存します。

図.1 アッセイの概要

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