FAQ：KactusBio（KCT）社　MaxNuclease™について

MaxNuclease™ は、セラチア マルセッセン由来の広範囲スペクトル ヌクレアーゼです。遺伝子組み換え大腸菌によって発現され、GMP グレードの環境で精製されます。この酵素は、一本鎖、二本鎖、線状、環状、天然、変性核酸など、あらゆる形態の DNA と RNA を分解できます。この酵素は、3 〜 5 塩基長の 5'-一リン酸オリゴヌクレオチドに分解しますが、塩基認識特異性はありません。MaxNuclease™ は、幅広い条件下で高い安定性と酵素活性を維持でき、サンプル中の核酸残留物の除去や、ウイルス ワクチン、ウイルス ベクター、組み換えタンパク質などの製薬業界での製品純度の向上に適しています。

1) 生物製品からの DNA/RNA の除去： 米国 FDAでは、治療用生物製品の各投与量における核酸含有量を 10pg 未満にすることが義務付けられています。MaxNuclease™ は、ワクチン、多糖類、タンパク質などの工業用生物製品における核酸の除去に使用でき、生物製品の最終的な核酸含有量が規制要件を満たし、生物製品の有効性が向上します。

2) 細胞培養由来製品の精製： 核酸は、ウイルス様粒子（VLP）、ウイルス粒子、封入体などの細胞生成粒子の表面に容易に付着し、粒子のサイズや電荷が変化して、末梢血単細胞（PBMC）の保存中に凝集現象が発生するなど、これらの粒子の凝集を引き起こします。MaxNuclease™ は、核酸を効果的に分解し、核酸が細胞製品や精製に与える影響を回避し、細胞製品の精製効率を向上させるのに役立ちます。

3) 溶解細胞の粘度低下： MaxNuclease™ は、あらゆる形態の核酸を分解し、細胞溶解物の粘度を低下させ、タンパク質収量を増加させ、分離効果を改善し、ろ過（特に限外ろ過）を容易にし、下流のクロマトグラフィー精製操作を容易にします。

4) 生化学分析用のサンプルの準備： ELISA、クロマトグラフィー、に相電気泳動、フットプリント分析などの分析では、核酸を含むタンパク質サンプルをMaxNuclease™で処理すると、解像度が向上し、回収率が向上します。

安定性実験は 25°C と 37°C で実施しました。MaxNuclease™ は、これら 2 つの条件下で 7 日間、酵素活性の 90% 以上を維持できることが分かりました。これは、酵素が適切な保存バッファー内で非常に安定していることを示します。安定性データについてはお問い合わせください。

製品は-20℃ で保管してください。凍結と解凍を繰り返さないでください。酵素の有効期限は少なくとも 2 年間です。

MaxNuclease™ はさまざまな用途に使用できます (【02】を参照)。その使用法と投与量は使用目的によって異なります。ウイルスワクチン、ウイルスベクター、組み換えタンパク質などの生物学的製品の製造の場合、MaxNuclease™ は通常、回収後、精製前に添加されます。

これは、アプリケーションシナリオと実験条件によって異なります。一般的に、AAV 製造プロセスの細胞溶解ステップでは 25-50U/mL が適しています。バッファーとアプリケーションが異なるため、酵素活性と最適濃度には比較的大きな違いがあります。たとえば、使用中に温度が 37°C 未満の場合、酵素活性は低下します。37°C と比較して、MaxNuclease™ は 4°C で約 22% の酵素活性を維持します。温度が 37°C 未満の場合は、反応時間を適切に延長することで、同様の核酸除去効果を達成できます。
酵素活性に影響を与える 3 つの条件は温度、ヌクレアーゼ濃度、使用時間であり、実際のアプリケーションでは、これら 3 つの条件を最適化していただければと存じます。MaxNuclease™ の使用についてサポートが必要な場合は、お問合せください。

酵素活性を維持するには 1〜2mM Mg²⁺ が必要です。酵素活性を維持するために、Mg²⁺ を追加して反応システムを調整することができます。

一価陽イオンでは、300mM を超える Na⁺、K⁺、または 100mM を超える硫酸アンモニウム沈殿剤など、酵素の活性を阻害する可能性があります。

さらに、1mM を超える EDTA は、酵素の活性に必要な Mg²⁺ イオンをキレートするため、酵素の活性を阻害します。尿素などの変性剤やプロテアーゼも酵素を不活性化します。

MaxNuclease™ は、デプス フィルトレーションやタンジェンシャル フロー フィルトレーション (TFF) などの技術を使用した下流での精製過程で簡単に除去できます。医薬品製造では、エンドヌクレアーゼはイオン交換クロマトグラフィーによって除去されることがよくあります。MaxNuclease™ の PI は 6.85 で、MaxNuclease を通過させたり溶出させたりするために、通常はアニオン交換クロマトグラフィーが使用されます。

また、MaxNuclelase™の残留物も医薬品の品質管理分析の一部です。一般的に、製品に残留するMaxNuclease™（活性および不活性を含む）を検出するには、ELISAキットを使用します。KACTUSが開発したMaxNuclease™検出キットは、２つの抗体を用いたサンドイッチ法を使用して、製品中のMaxNuclease™の残留物を正確に定量し、感度は23.44 pg/mL、直線範囲は46.88 pg/mL〜3000.00 pg/mLです。

1 活性単位は、37°C、pH 8.0 で 30 分間、過剰量の Herring Sperm DNA の条件下で 260 nm での吸光度を 1.0 変化させるために必要な酵素量に相当します（37 µg の DNA 基質を完全に消化するために必要な酵素量に相当）。MaxNuclease™ の検証済み酵素活性は≥ 250 U/µL です。