補体のアッセイ方法 | Hycult Biotech 社

日本語カタログあります
PDFダウンロード【1976 KB】

補体の解析を正確に行うには、正しい技術を使用するだけでなく、誤った結果を避けるために分析前のサンプル処理が適切な方法で実行されることも重要です。補体研究を専門とするシニアサイエンティストのErik Toonenは、同じく補体研究を専門とするRicardo Brandwijkが率いる専門家チームとともに、Pubmed/MEDLINEデータベースで広範な文献検索を実施しました。2017年2月から2022年2月までの発表期間で、ヒト血液サンプル中の重要な補体成分を測定した研究に焦点が当てられ、特定の研究で、分析に正しいサンプルタイプと技術が使用されているかどうかをレビューしました。彼の調査結果については、以下をご覧ください。

376件の研究のうち、合計92件を全文解析用に選択した。45 件の研究 (49%) では補体分析に適切なサンプルの種類と手法が使用されていましたが、25 件の研究 (27%) では適切なサンプルの種類または手法が使用されていませんでした。22 件の研究 (24%) では、どのサンプルタイプが使用されたかが明記されていませんでした。

レビューされた研究の大部分は、補体活性化を評価するために適切なサンプルタイプを使用していなかったか、どのサンプルタイプが使用されたかについて言及していませんでした。標準化された手順から逸脱した方法を用いることは、補体バイオマーカー値の誤った解釈につながり、試験間で補体測定値を適切に比較することを妨げる可能性があります。したがって、ここでは、正確で推奨される手順のための一般的なガイドラインの必要性をについて説明します。

適切なサンプルタイプ

正しいサンプルタイプを選択するには、まず補体系の全体的な機能を評価するのか、特定の成分を評価するのかを区別することが重要です。
補体機能の評価に重点を置く場合は、補体保存血清を使用することが重要です。逆に、個々の補体成分を評価する場合は、EDTA 血漿を使用する必要があります。以下に示すフローチャートは、適切なサンプルの種類を決定し、最も適切なサンプル前処理方法を選択するのに役立ちます。

適切な手法

どの技術またはアッセイが研究に最適かを判断するには、補体機能の評価を実施しているのか、それとも個々の補体成分の評価を実施しているのかを特定することも重要です。補体機能を評価する場合、最も適した技術としては、溶血性細胞活性アッセイ、機能的 ELISA、または機能化リポソームなどがあります。個々の補体成分の評価には、ネフェロ分析、ELISA、マルチプレックスアッセイ、OMICS/タンパク質アレイ、または質量分析法が推奨される方法です。

この表は、補体分析に適したサンプルの種類と手法を選択するのに役立ちます。
以下を選択するためにフローチャートをご参考ください
(A)適切なサンプル・タイプ
(B)補体を評価するための適切な手法。

補体系は免疫システムの重要な部分であり、外来病原体を識別して破壊するために連携して働く 30 種類以上のタンパク質で構成されています。補体活性化には、古典的経路、レクチン経路、代替経路の3つの主要な経路があります。

古典的経路(Classical Pathway)

古典的経路は、抗体が病原体表面の特定の抗原に結合することで活性化されます。この結合により、補体タンパク質のカスケードが引き起こされ、互いに結合して活性化し、最終的に病原体の細胞膜を突き刺して破壊する膜攻撃複合体 (MAC) の形成につながります。

レクチン経路(Lectin Pathway)

レクチン経路は、レクチンと呼ばれるタンパク質が病原体の表面にある特定の糖に結合すると活性化されます。この結合により、同様の補体タンパク質活性化カスケードが引き起こされ、MAC の形成と病原体の破壊につながります。

代替経路(Alternative Pathway)

代替経路は低レベルで常にアクティブであり、病原体または損傷した宿主細胞の表面にある特定の分子の存在によって引き起こされる可能性があります。この経路は MAC の形成と病原体の破壊にもつながります。 これら 3 つの補体経路はすべて連携して、侵入する病原体に対して迅速かつ効果的な防御を提供します。また、免疫反応を調節し、損傷した宿主細胞を除去する役割も果たします。補体系の機能不全は、自己免疫疾患や感染症など、さまざまな疾患を引き起こす可能性があります。