動画で見る「抗体の吸着処理」
※ご注意 本動画の字幕（日本語）は、ご参照用となります。正確な内容につきましては、音声（英語）をご確認ください。
動画のトランスクリプト
吸着処理済み抗体
吸着処理（もしくは交差吸着処理）とは、二次抗体の特異性を高め、宿主動物種に対する望ましくない反応性を排除する、追加の精製工程のことです。
二次抗体は、別の動物種の血清タンパク質に対して、またはいくつか混ぜ合わせた動物種の血清タンパク質に対して、事前に吸着させることができます。
これらの二次抗体は、通常、目的のシグナルの 1% 未満という極めて低いレベルでしか交差反応性を示さないため、様々な実験で宿主動物が異なる複数の一次抗体を使用することができます。
また、サンプルの動物種に対して事前に吸収された二次抗体を使用することも推奨されています。
Fab フラグメント抗体
Fab フラグメント抗体は、抗体分子の 50 kDa の一価 のFab 抗体部分から構成されています。
Fab フラグメント抗体は、パパインでの消化と精製によって作られます。
これらのフラグメントは分子の Fc 部分が欠如しており、Fc 受容体と相互作用しないため、関与する細胞または組織内の非特異的結合を排除することができます。
試薬のサイズが小さいほど、免疫組織化学染色における浸透性が高くなります。
同じ種由来の一次抗体を使用する場合、非標識 Fab フラグメントを使用して、細胞や組織上の内因性免疫グロブリンをブロックすることもできます。
また、二価の F(ab')2 フラグメントとは対照的に、一価の Fab フラグメントでは、同じ宿主動物種由来の 2種類の一次抗体を使用した二重標識実験が可能です。
F(ab')2 フラグメント抗体
F(ab')2 フラグメント抗体は、whole IgG 抗体をペプシンで消化し、ヒンジ領域をintactなまま残した状態でFc 領域の大部分を除去することによって作られます。
F(ab')2 フラグメントには、2 つの抗原結合 F(ab) 部分が結合しており、フルサイズの抗体と同じ、完全な抗原結合能力を持っています。
Fab フラグメントと同様に、F(ab')2 フラグメント抗体は、抗体の Fc 部分と Fc 受容体を発現する組織や細胞との間の非特異的結合を排除します。
F(ab')2 フラグメント結合抗体は、フローサイトメトリー、免疫組織化学染色、および免疫蛍光染色に最適です。
抗 IgG (H&L) 二次抗体
IgG 分子の重鎖および軽鎖に対して生成された抗体は、共通の軽鎖に結合することによりIgE や IgM などの他の免疫グロブリンクラスと交差反応します。
しかしながら、エピトープ結合部位の範囲が広いため、イムノアッセイでは最も汎用的な二次抗体の種類となります。
抗 IgG Fc 二次抗体
Fc特異的二次抗体はクラス特異的であり、共通の軽鎖に結合することによって他の免疫グロブリンクラスと交差反応を示すことはありません。
これらはwhole IgG 分子を認識する抗体よりも交差反応が起こりにくいです。
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