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アデノ随伴ウイルス粒子をヘルパーフリーで簡便にパッケージング可能 AAV Packaging Mix

メーカー名：Applied Biological Materials Inc.

アデノ随伴ウイルス（AAV）粒子をヘルパーフリーで作製するためのパッケージングミックスです。
セロタイプ1～6のパッケージングミックスをラインアップしており、トランスフェクション試薬DNAFectin™が付属するコンボパックも提供しております。

アデノ随伴ウイルス（AAV）とは

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背景

ヘルパーフリーアデノ随伴ウイルス（AAV）粒子の作製には、以下の3つのコンポーネントが必要です。

目的のインサート配列（cDNA、shRNA、miRNA）を含むAAV発現ベクター
ヘルパーアデノウイルスの必要性を排除する、アデノウイルス由来遺伝子を含むパッケージングベクター
AAVのセロタイプ（血清型）および指向性を決定するRep（replication）とCap（capsid）タンパク質を発現するパッケージングベクター

Applied Biological Materials社のAAV発現ベクターは、全て野生型ITR配列を含み、いずれかのセロタイプ特異的パッケージングミックスを使用してパッケージングすることができます。パッケージングミックスはプレミックスタイプで提供されるため、発現ベクターと特定のセロタイプパッケージングミックスを混合してトランスフェクションされます。各キットに含まれるパッケージングミックスは10⁹ GC/mL の力価で3つのウイルスをパッケージングするために十分な量が含まれ、 DNAFectin™ transfection reagent（1ml、品番：G2100）が付属するコンボパックもございます。

特長

品番	品名	Packaging Mix セロタイプ	DNAFectin™ 付属の有無	ベクターマップ
AAV1001	AAV Packaging Mix (Serotype 1)	セロタイプ 1	-	※pAAV-Helperベクターは共通です。
AAV1001-G2100	AAV Packaging Mix (Serotype 2) & DNAFectin™ Combo Pack	セロタイプ 1	〇	※pAAV-Helperベクターは共通です。
AAV1002	AAV Packaging Mix (Serotype 1)	セロタイプ 2	-
AAV1002-G2100	AAV Packaging Mix (Serotype2) & DNAFectin™ Combo Pack	セロタイプ 2	〇
AAV103	AAV Packaging Mix (Serotype 1)	セロタイプ 3	-
AAV1003-G2100	AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack	セロタイプ 3	〇
AAV1004	AAV Packaging Mix (Serotype 1)	セロタイプ 4	-
AAV1004-G2100	AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack	セロタイプ 4	〇
AAV1005	AAV Packaging Mix (Serotype 1)	セロタイプ5	-
AAV1005-G2100	AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack	セロタイプ5	〇
AAV1006	AAV Packaging Mix (Serotype 1)	セロタイプ 6	-
AAV1006-G2100	AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack	セロタイプ 6	〇

プロトコール

パッケージング

[プロトコール詳細] AAV Packaging Mix Protocol PDF

DAY 1
1.	15cm ディッシュにHEK293 細胞を播種します（～1.2 x 10⁷）。
DAY 2
2.	細胞が70～80%コンフルエントであることを確認します。
3.	各15cm ディッシュに対して、以下のトランスフェクション複合体を調製します。
	a) 溶液A： gene of interest 10µg AAVパッケージングミックス（AAV1001、AAV1002、AAV1003、AAV1004、AAV1005、AAV1006）10µg in 3 mL serum-free, antibiotic- free medium 溶液B：227µL DNAFectin™ Transfection Reagent（G2100）in 3mL serum-free, antibiotic-free medium b)溶液AおよびBを室温で5分間インキュベートします。 c)溶液Aと溶液Bを混合し、室温で20分間インキュベートします（トランスフェクション複合体）。
4.	トランスフェクション複合体に無血清、抗生物質フリーの培地12mL を加えます。
5.	15cm ディッシュから培地を除去します。
6.	ステップ4で調製したトランスフェクション複合体を細胞に加え、37℃で5～8時間インキュベートします。
7.	1.5mL のFBSを加え、細胞を一晩インキュベートします。
DAY 3／DAY 4
8.	細胞変性効果（CPE：cytopathic effects）を確認するために細胞をモニターします。通常、3日目／4日目にCPEは観察されます。
9.	5日目まで細胞をインキュベートします。
DAY 5
10.	trypsin-EDTAまたはセルスクレーパーで細胞を回収し、3,000rpm、4℃で15分間遠心してペレットにします。
11.	上清を除去し、250μl の滅菌済1X PBSで2回洗浄します。
12.	細胞ペレットを-80°Cで3回凍結融解させ、37℃でウイルスを上清に放出させます。
13.	10,000rpm で20分間遠心します。
14.	0.45µM のタンパク質低吸着の滅菌フィルターに通します。
15.	フィルターにかけた上清は、さらに精製するか下流のアプリケーションに利用できます。または、-80℃でウイルスストックとして保存できます。

インフェクション

[プロトコール詳細] AAV Infection Protocol PDF

AAV Packaging Mix

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
AAV Packaging Mix (Serotype 1)	APB	AAV1001	100 UG	お問い合わせ
AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAfectin Combo Pack	APB	AAV1001-G2100	1 KIT	販売終了
AAV Packaging Mix (Serotype 2)	APB	AAV1002	100 UG	お問い合わせ
AAV Packaging Mix (Serotype 2) & DNAfectin Combo Pack	APB	AAV1002-G2100	1 KIT	お問い合わせ
AAV Packaging Mix (Serotype 3)	APB	AAV1003	100 UG	お問い合わせ
AAV Packaging Mix (Serotype 3) & DNAfectin Combo Pack	APB	AAV1003-G2100	1 KIT	お問い合わせ
AAV Packaging Mix (Serotype 4)	APB	AAV1004	100 UG	お問い合わせ
AAV Packaging Mix (Serotype 4) & DNAfectin Combo Pack	APB	AAV1004-G2100	1 KIT	お問い合わせ
AAV Packaging Mix (Serotype 5)	APB	AAV1005	100 UG	お問い合わせ
AAV Packaging Mix (Serotype 5) & DNAfectin Combo Pack	APB	AAV1005-G2100	1 KIT	お問い合わせ
AAV Packaging Mix (Serotype 6)	APB	AAV1006	100 UG	お問い合わせ
AAV Packaging Mix (Serotype 6) & DNAfectin Combo Pack	APB	AAV1006-G2100	1 KIT	お問い合わせ

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品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
DNAfectin^TM 2100 Transfection Reagent	APB	G2100	1 ML [1.0 mg/1.0 ml]	販売終了
Trypsin Solution C (0.05%), EDTA (0.02%), with Phenol Red	BLG	03-053-1B	100 ML	販売終了
Recombinant Trypsin EDTA Solution (Animal Component-Free)	BLG	03-079-1A	500 ML	SSJ社 030791A 500 を参照
Recombinant Trypsin EDTA Solution (Animal Component-Free)	BLG	03-079-1B	100 ML	SSJ社 030791B 100 を参照