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免疫沈降（IP）で豊富な実績！高い特異性と親和性、Nano-Trap シリーズ HA-Trap Agarose（アガロースビーズ標識HAタグ抗体）

メーカー名：Proteintech Group, Inc.

HA-Trap Agarose（HAトラップアガロース）は、HAタグ融合タンパク質の免疫沈降（IP：Immunoprecipitation）実験に最適なアガロースビーズ担体結合済みのHA-Tag抗体です。

アガロースビーズ（agarose beads）には、アルパカ（Alpaca）を宿主動物（免疫動物）として作製された「抗HAタグ組換えモノクローナルVHH抗体」が結合しています。VHH抗体は、Nanobody®としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインであり、高い特異性と親和性を示します。

高親和性&高特異性アルパカ組換えVHH免疫沈降（IP）に最適

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背景

■ VHH抗体とは?

VHH抗体は、Nanobody® としても知られるラクダ科動物の「重鎖抗体（Heavy chain-only antibody）」由来の抗原結合ドメインです。一般的な抗体と比べて、10分の1程度とサイズが小さく、高い特異性と親和性を示すことで知られます。

図. ラクダ科動物のユニークな重鎖抗体・VHH

図. 従来の1/10ほどの分子量

ChromoTek（クロモテック）抗体・関連製品

■ Nano-Trapとは?

Nano-Trap（ナノトラップ）は、迅速かつ効率的な免疫沈降（IP）に最適です。各種担体（アガロースビーズ、磁性アガロースビーズ、磁気ビーズ）に結合したVHH抗体で構成されます。

各種ビーズ上に結合したVHH抗体は、ビーズ上に残存し、SDSサンプルバッファー中で溶出されません。したがって、従来のIP解析でしばしば問題となるIP抗体由来の軽鎖または重鎖バンドの干渉が無く、シングルバンドの精製を可能とします。さらに、ウエスタンブロットに使用する一次抗体/二次抗体を自由に選択できます。

Nano-Trap（ナノトラップ）

■ Nano-Trapのアプリケーション

IP（免疫沈降）/ CoIP（共免疫沈降）
ChIP（クロマチン免疫沈降）/ RIP（RNA免疫沈降）
質量分析（Mass spectrometry）
On-bead enzyme assay

［参考資料］免疫沈降（IP）と共免疫沈降（Co-IP）のトラブルシューティングガイド

図. Nano-Trap（左）と従来型であるProtein A/G結合IgG抗体（右）を用いた免疫沈降の概要。Nano-Trapでは、単一のバンドを得られ、従来型とは異なり軽鎖/重鎖由来のバンドは観察されません。

■ Proteintech Group（プロテインテック）とは?

Proteintech Group, Inc.（プロテインテック）社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン（www.ptglab.co.jp 外部リンク）が担当しています。

全てオリジナル商品：自社ラボで製造、検証済み（購入後1年間の交換保証付き）
数多くの評判：国内・海外における累計104,300報以上の論文使用実績（2024年4月現在）
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プロテインテックは「日本で成長している抗体サプライヤー」

ProteintechとChromoTekは2022 CiteAb Awardsで表彰されました

プロテインテックとChromoTek（クロモテック、ドイツ）は、引用数ランキング付の抗体検索サイトを運営する英国「CiteAb 外部リンク」が主催の「2022 CiteAb Awards」において「Researchers' choice（研究者の選択）」部門と「Environmental Initiative of the Year（今年の環境イニシアチブ）」部門でそれぞれ受賞者として選出されました。優れた品質およびカスタマーサービス、環境への取り組みが高く評価されています。

また「Which suppliers should you watch in the Japanese antibody market?（日本の抗体市場で注目すべきサプライヤーは?）外部リンク」のブログ記事で、近年発表された論文中の製品引用数を根拠にプロテインテックが「日本で成長している抗体サプライヤー」として「注目に値するシェアの拡大・急上昇」を見せていると言及されています。以下のリンクから、プロテインテックの主なカテゴリー製品をご覧いただけます。

抗体&免疫アッセイ

サイトカイン・増殖因子外部リンク

ChromoTek 試薬外部リンク

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特長

■ HA-Trap Agarose（アガロースビーズ標識HAタグ抗体）
商品名	HA-Trap Agarose（HAトラップアガロース）（Nano-Trap alpaca anti-HA-Tag, recombinant VHH, coupled to agarose beads）（アガロースビーズ標識アルパカ由来抗HAタグナノ抗体）
品番	ata-10/ata-20/ata-100/ata-200/ata-400
免疫原／抗原	HA-Tag（アミノ酸配列：YPYDVPDYA）
交差種	-
特異性	HA-Tag（アミノ酸配列：YPYDVPDYA）
アプリケーション	IP（免疫沈降）、CoIP（共免疫沈降）
標識	アガロースビーズ（Agarose Beads）
宿主動物/免疫動物	アルパカ（組換えモノクローナルVHH抗体）
クローン番号	-
抗体タイプ	アルパカ由来シングルドメイン抗体（Alpaca single domain antibodies）
抗体親和性（KD値）	6 nM for C-terminal HA-tags and ca. 180 nM for N-terminal fusions.
結合キャパシティ	20 µg of recombinant HA-tagged protein (~30kDa) per 25 µL bead slurry
容量	250 µL (10 reactions)/500 µL (20 reactions)/2.5 mL (100 reactions)/5 mL (200 reactions)/10 mL (400 reactions)
フォーマット	液体（slurry）
ビーズ詳細	Bead size: ~ 90 µm (cross-linked 4 % agarose beads)
洗浄バッファー適合性	2M NaCl, 5 mM DTT, 0 mM β-mercaptoethanol, 5 mM TCEP, 2% NP40, 2% Triton X-100, 0% SDS, 2-3 M Urea
溶出方法	2x SDS-sample buffer (Lammli)
別名	Recombinant, monoclonal anti-HA-Tag single domain antibody (sdAb) fragment
バッファー・保存剤	20 % EtOH
保存方法	商品到着後は、4℃で保管してください。凍結はしないよう注意してください（凍結禁止）。

その他

■ HA-Trap アプリケーション参考資料

［プロトコール］HA-Trap Agarose
［プロトコール］HA-Trap Agarose Kit

よくある質問 FAQ

【01】N末端とC末端融合タグはどちらも機能しますか?

はい、N末端とC末端融合タグのどちらも機能します。

【02】非特異的タンパク質の結合を回避する方法はありますか?

必要に応じて、サンプルの「プレクリア処理（Pre-clearing）」を実施してください。その際、コントロールアガロース（品番：bab-20）またはコントロール磁性アガロース（品番：bmab-20）を利用できます。詳細は以下のトラブルシューティングガイドをご覧ください。

［参考資料］免疫沈降（IP）と共免疫沈降（Co-IP）のトラブルシューティングガイド

【03】免疫沈降に必要な哺乳類細胞数を教えてください。

1回の免疫沈降反応で約10^6~10^7の哺乳類細胞の使用をおすすめします。収量は目的のタンパク質や相互作用因子の発現レベルに依存する場合があります。

【04】免疫沈降に必要な細胞抽出物量を教えてください。

哺乳類細胞以外の場合、0.5~1.0mgの細胞抽出物の使用をおすすめします。

【05】質量分析のために、結合タンパク質をビーズから溶出する必要がありますか?

免疫沈降後にビーズ上で直接消化する方法も利用可能です。より迅速で効率的なサンプル前処理と高収率を実現します。詳細は以下の資料をご覧ください。

［参考アプリケーション］MS解析用On-bead digestプロトコール

【06】酵素アッセイのために目的タンパク質をビーズから溶出する必要がありますか?

いいえ、活性中心がブロックされていない限り、直接酵素アッセイが可能です。詳細は以下の資料をご覧ください。

［参考アプリケーション］ワンステップ精製：GFPタグ融合タンパク質の酵素活性検出

【07】1回の免疫沈降に必要なNano-Trap量を教えてください。

親和性が非常に高いため、1回の反応あたり25 µL（Nano-Trap slurry量）で十分です。

［プロトコール］HA-Trap Agarose
［プロトコール］HA-Trap Agarose Kit

【08】各HA-Trap（アガロース、磁性アガロース、磁性ビーズ）の違いを教えてください。

各ビーズの特性（表1）に基づいて以下のように推奨します。

アガロースビーズ（Agarose）：非常に低いバックグラウンドおよび高い結合能を必要とするIPに最適
磁性アガロースビーズ（Magnetic Agarose）：磁気分離および高い結合能を必要とするIPに最適
磁気ビーズ（Magnetic Particles M-270）：磁気分離および非常に大きなタンパク質を対象とするIPに最適

表1. HA-Trap各種ビーズの特性
HA-Trap結合担体	アガロース	磁性アガロース	磁気ビーズ
ビーズ詳細	アガロース（4% cross-linked）	磁性アガロース（6% cross-linked）	磁気ビーズ M-270
ビーズ形状	多孔質	多孔質、鉄コア	固体
結合抗体	抗HAタグ組換えモノクローナルVHH抗体
分離可能なタンパク質サイズ*1	小～大（<200 kDa）		小～大（<200 kDa）特大（>200 kDa）
ビーズ外観	白	黒	茶
ビーズサイズ	90 µm	40 µm	2.8 µm
結合能*2 （10 µLあたり）	20 µg	20µg	5 µg
バックグラウンド	非常に低い	低い
磁気分離/自動化	No	Yes
最大遠心力（x g）	2,500 x g	800 x g	8,000 x g

*1 タンパク質のサイズ、形状、多量体/複合体、相互作用因子に依存します。
*2 約30 kDaのHA タグ融合タンパク質を適用した場合の結合能を示しています。

使用例

■ HA-Trap Agarose（アガロースビーズ標識HAタグ抗体）（品番：ata-10/-20/-100/-200/-400）

図1
The HA-Trap Agarose (left) and a competitor resin (right) were used to immunoprecipitate TOM70-HA fusion protein from either untransfected (mock) HEK293T cells or HEK293T cell transfected with full-length TOM70-HA construct. Immunoprecipitation with HA-Trap Agarose results in clean, single-band pulldowns without any heavy and light chain contamination. SDS-PAGE analysis was done on samples from the Input (I), Flow-through (F), Bound (B) fractions.

HA-Trapアガロースを用いたTOM70-HAタグ融合タンパク質とHSP90の共免疫沈降

図2
Co-IP using HA-Trap Agarose followed by multiplexed WB of TOM70-HA and HSP90 proteins from untransfected (mock) HEK293T cells and HEK293T cells transfected with full-length TOM70-HA construct. WB analysis was done on samples from the Input (I), Flow-through (F) and Bound (B) fractions of the IP. TOM70 Monoclonal Antibody (66593-1-Ig), Multi-rAB CoraLite Plus 488-Goat Anti-Mouse Recombinant Secondary Antibody (RGAM002), HSP90 Polyclonal Antibody (13171-1-AP), and Multi-rAb CoraLite Plus 750-Goat Anti Rabbit Recombinant Secondary Antibody (RGAR006) were used in the WB analysis.

HA-Trapアガロースを用いたPCNA-HAタグ（N末端またはC末端）融合タンパク質を免疫沈降

図3
The HA-Trap Agarose was used to immunoprecipitate HA-PCNA and PCNA-HA proteins from transfected HEK293T cells. WB analysis was done on samples from the Input (I), Flow-Through (F), and Bound (B) fractions of the IP using PCNA Monclonal Antibody (60097-1-Ig) and Multi-rAb HRP-Goat Anti-Mouse Recombinant Secondary Antibody (RGAM001). The HA-Trap is succesful in pulling down HA-tagged PCNA regardless of whether the tag is fused to the N- or C-terminal. Note: PCNA forms trimers, resulting in co-elution of endogenous PCNA with HA-tagged PCNA.

HA-Trapアガロースを用いたPCNA-HAタグ融合タンパク質の免疫沈降後に競合法で溶出した

図4
The HA-Trap Agarose was used to immunoprecipitate HA-PCNA fusion protein from HEK293T cells. HA-PCNA protein was released from the trap through a two-step competitive elution with HA-peptide (ap). Samples from the Input (I), Flow-Through (F), 1st elution (E1), 2nd elution (E2), and residual (R) fractions were analyzed through WB. PCNA Monoclonal Antibody (60097-1-Ig) and Multi-rAb HRP-Goat Anti-Mouse Recombinant Secondary Antibody (RGAM001) were used in the WB analysis. Note: PCNA forms trimers resulting in co-elution of endogenous PCNA proteins with HA-tagged PCNA.

■ 全ての評価データはこちらから閲覧できます

HA-Trap Agarose（アガロースビーズ標識HAタグ抗体）（品番：ata-10/-20/-100/-200/-400）検証データ

HA-Trap Agarose（アガロースビーズ標識HAタグ抗体）

■アガロースビーズ標識モノクローナル抗体（組換えVHH抗体）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Anti HA tag, HA-Trap, recombinant VHH (Alpaca) Agarose	PGI	ATA-10	10 RXN	￥55,000
Anti HA tag, HA-Trap, recombinant VHH (Alpaca) Agarose	PGI	ATA-20	20 RXN	￥92,000
Anti HA tag, HA-Trap, recombinant VHH (Alpaca) Agarose	PGI	ATA-100	100 RXN	￥415,000
Anti HA tag, HA-Trap, recombinant VHH (Alpaca) Agarose	PGI	ATA-200	200 RXN	お問い合わせ
Anti HA tag, HA-Trap, recombinant VHH (Alpaca) Agarose	PGI	ATA-400	400 RXN	お問い合わせ

［関連］HA-Trap Agarose（アガロースビーズ標識HAタグ抗体）キット

■ 「推奨バッファー」も入ってお得な免疫沈降（IP）キットです。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
HA-Trap Agarose, kit (Alpaca)	PGI	ATAK-20	20 RXN	￥115,000

「アガロースビーズ標識HAタグ抗体」と「バッファー類（Lysis buffer、RIPA buffer、Dilution buffer、Wash bufferを含む）」のセット商品です。

［関連］Binding Control Agarose（コントロールアガロース）

「結合コントロール」または「プレクリア処理（Pre-clearing）」に利用できるアガロースビーズです。VHH抗体は結合していません。プレクリア処理に関しては、プロテインテック社ブログ記事「ヒントとコツ | 免疫沈降（IP）でバックグラウンドを低減するための最適化方法外部リンク」をご参照ください。